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※ 참조논문 : An Alphavirus-derived replicon RNA vaccine
                Jesse H. Erasmus, et al., SCIENCE TRANSLATIONAL MEDICINE, 2020


2020년 미국 HDT Bio (Host Directed Therapeutics Biotechnology) 사는 강력한 RNA Delivery 플랫폼인 LION™ (Lipid Iron Oxide Nanoparticles) RNA Delivery System 을 개발하였습니다.


LION™ RNA Delivery System 은 다음 내용으로 구성되어 있습니다.
Squalene : Vaccine Adjuvant 기능을 하며 LION™ 의 골격을 형성하는 역할
SPIO : Super paramagnetic Iron Oxide, Fe3O4, 양이온산화철 : 양이온을 띄고 있어 RNA 와 결합하는 기능
DOTAP : the cationic lipid 1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium propane : RNA 와 결합하여 RNA-combined LION™ 을 매우 stable 상태로 유지시켜 주는 핵심적인 기능
SPAN 60 : 계면활성제
Tween 80 : 계면활성제

LION™ system 을 RNA 와 mixing 하면 RNA 가 LION™ 에 강하게 결합하여 RNA-combined LION 이 된다.



RNA-combined LION™ 의 RNA 가 어느 정도 안정하게 존재하는지 확인하기 위해 RNAse 처리하여 전기영동으로 확인한 결과 LION™ 에 combined 된 RNA 는 매우 안정한 상태를 유지하는 것을 알 수 있었다.



또한 LION™ 에 combine 된 RNA 는 온도변화에도 매우 안정한 상태를 유지하고 있는 것을 확인할 수 있었다.



LION™ formulation

LION™ formulation that SPIO nanoparticles within a hydrophobic squalene core to enhance formulation stability.

- 37.5 mg/ml squalene
- 30 mg/ml DOTAP chloride
- 37 mg/ml Span® 60
- 37 mg/ml Tween® 80

LION™ formulation 과정

1 combine the iron oxide nanoparticles with the oil phase (Squalene, Span 60, and DOTAP)
2 sonicate for 30 minutes in a 65°C water bath
3 Separately, the aqueous phase, containing Tween 80 in water, was prepared with continuous stirring until all components were dissolved.
4 The oil and aqueous phases were then mixed and emulsified using mixer
5 the crude colloid was subsequently processed by passaging through a microfluidizer at 20,000 psi with a LM10 microfluidizer equipped with a H10Z-100 μm ceramic interaction chamber (Microfluidics) until the z-average hydrodynamic diameter - reached 50 ±5 nm with a 0.2 polydispersity index.
6 The microfluidized LION™ was terminally filtered with a 200 nm pore-size polyethersulfone (PES) filter and stored at 2-8°C
7 Replicon RNA was complexed with LION™ formulations and placed on ice for 30 min

LION™ RNA Delivery Platform 특징

- 매우 많은 양의 target 단백질을 생성하여 빠른 면역 또는 치료 작용을 기대 (~50배)
- 인체내에서 매우 안정하다,
- 면역보강제 (vaccine adjuvant) 가 포함되어 있다.
- 상온 보관이 가능
- 가격이 저렴
- 제조가 매우편리하다


LION™ RNA Delivery System 을 이용하여 COVID-19 mRNA Vaccine 을 만드는 과정은 HDT Bio 사의 Chief Scientific Officier 인 Dr. Darrick Carter 가 진행하는 아래 세미나 동영상을 참조하십시요.

그리고 LION™ RNA Delivery System 관련 자세한 내용은 다음 사이트를 참조하십시요.
- bioRxiv





※ 이 화면을 click 하시면 Youtube 동영상으로 이동됩니다.

이 발표는 다음과 같은 내용으로 이루어 져 있습니다.

- Overview of RNA from discovery to approval of an mRNA vaccine in 2020
- LNPs, CNEs and LION™ - The limitations and advantages of major delivery systems
  in use for RNA
- How self-amplifying RNAs work
- Vaccine results with LION™, a next generation RNA delivery system
- Future uses of mRNA Technology for medical breakthroughs
- Cost consideration for scale-up
- Using Microfluidizer® processors in manufacturing for global commercial distribution











 
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