Phone
  ´ëÇ¥ÀüÈ­ 1577-7956  
  º»     »ç 031-457-9187  
  ´ë     Àü 042-932-1265

Web Site Visitors
  Today 493    
  Yesterday 897    
  Since 2006 1,916,209    


¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç Á¾ÇÕÄ«´Ù·Î±×
| ¿øº»º¸±â | ¸®½ºÆ®µ¹¾Æ°¡±â |


Introduction

¼¼Æ÷°¡ Cytotoxicity Àڱؿ¡ ³ëÃâµÇ¸é ´ë»ç È°µ¿À̳ª ¼ºÀåÀÌ ÀúÇØµÉ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ±Ã±ØÀûÀ¸·Î´Â Necrosis ³ª Apoptosis ¿Í °°Àº ¼¼Æ÷ »ç¸ê¿¡ À̸£°Ô µË´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ, Cytotoxic È­ÇÕ¹°Àº Á¾Á¾ ±âÀü¿¡ »ó°ü¾øÀÌ ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¼Õ»óÀ» À¯¹ßÇϸç, ¼¼Æ÷¸·ÀÌ È¸º¹µÉ ¼ö ¾øÀ» Á¤µµ·Î ¼Õ»óÀ» ÀÔ°Ô µÇ¸é °á±¹ »ç¸êµË´Ï´Ù. Apoptosis µ¿¾È¿¡´Â Pseudopodia ÀÇ ¼öÃà, Pyknosis, Karyorrhexis, ±×¸®°í ±Ã±ØÀûÀ¸·Î´Â ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¹«°á¼º »ó½Ç°ú °°Àº Morphology º¯È­°¡ ÀϾ´Ï´Ù. Necrosis ¸¦ Ư¡Áþ´Â Morphology º¯È­´Â ¼¼Æ÷Áú ºÎÁ¾°ú Ãʱ⠼¼Æ÷¸· ÆÄ¿­ÀÌ Æ÷ÇԵ˴ϴÙ.

Cytotoxicity ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ´Â ºÐ¼®¹ýÀº ƯÁ¤ Á¶Á÷¿¡ ´ëÇÑ µ¶¼ºÀ» ¿¹ÃøÇϰųª Ç×¾Ï Ä¡·áÁ¦¸¦ ã°í ºÐ·ùÇÏ´Â µ¥ »ç¿ëµË´Ï´Ù. ÀÇ·á±â±âÀÇ »ýü ÀûÇÕ¼º ¿ª½Ã Cytotoxicity ºÐ¼®À» ÅëÇØ ÀÌ·ç¾îÁö¸ç, Incucyte¢ç Cytotoxicity ÀÇ ¼¼Æ÷ ±â¹Ý Cytotoxicity Å×½ºÆ®·Î Æò°¡ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ÀϹÝÀûÀ¸·Î »ç¿ëµÇ´Â Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº ¿©·¯°¡Áö ¿ä¼Ò¸¦ µ¿½Ã¿¡ Æò°¡ÇÕ´Ï´Ù. ¼¼Æ÷¸·ÀÌ ÆÄ¿­µÈ ÈÄ ¹æÃâµÇ´Â Lactate dehydrogenase (LDH) È¿¼Ò¿Í Glutathione (GSH), Reactive oxygen species (ROS) ÀÇ »ý¼º, Cell proliferation, ±×¸®°í ¹ÌÅäÄܵ帮¾Æ ¸· ÀüÀ§ÀÇ Æı«¿Í °°Àº ´Ù¾çÇÑ ÃÖÁ¾ ´ë»ç È°µ¿ ÃøÁ¤ÀÌ Æ÷ÇԵǸç, ¼¼Æ÷¸· Æı« ¿©ºÎ¸¦ Æò°¡Çϱâ À§ÇØ Propidium iodide ³ª Çü±¤ Çö¹Ì°æ, À¯¼¼Æ÷ ºÐ¼®À» À§ÇÑ ±âŸ ¿°»öÁ¦°¡ »ç¿ëµË´Ï´Ù.

ÀÌ·¯ÇÑ ºÐ¼®¹ýÀÇ Áß¿äÇÑ ¿ä¼Ò·Î´Â È­ÇÕ¹°ÀÇ ³óµµ¿Í, È­ÇÕ¹°ÀÌ È¿°ú¸¦ ³ªÅ¸³»´Â µ¥ °É¸®´Â ½Ã°£ÀÌ ÀÖ½À´Ï´Ù. Multiplex ºÐ¼®¹ýÀº ¿©·¯ °¡Áö Cytotoxicity ÁöÇ¥¸¦ µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖÁö¸¸, ÀϹÝÀûÀ¸·Î ÇÑ ½ÃÁ¡¿¡¼­¸¸ Æò°¡°¡ ÀÌ·ç¾îÁö±â ¶§¹®¿¡ ½Ã°£¿¡ µû¶ó »ý¹°ÇÐÀû È°µ¿ÀÌ ¾î¶»°Ô º¯È­ÇÏ´ÂÁö Æò°¡ÇÏÁö´Â ¸øÇÕ´Ï´Ù. ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¼Õ»ó ¿©ºÎ¸¦ µ¿ÀûÀ¸·Î ÃøÁ¤Çϱâ À§ÇØ ½Ç½Ã°£À¸·Î ¼¼Æ÷¸¦ ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹æ¹ýÀÌ °³¹ßµÇ¾úÁö¸¸, Á¤È®ÇÑ Æò°¡¸¦ À§Çؼ­´Â ÃÖÀûÈ­µÈ ±â¼ú°ú ½Ã¾àÀÌ ÇÊ¿äÇÕ´Ï´Ù.

º» ³ëÆ®¿¡¼­´Â ¼¼Ã´ ¾øÀÌ »ç¿ë °¡´ÉÇÑ Mix-and-read ½Ã¾à°ú ÅëÇÕµÈ À̹ÌÁö ±â¹Ý ºÐ¼® µµ±¸¸¦ È°¿ëÇÑ Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀÇ À¯¿ë¼ºÀ» ¼³¸íÇÕ´Ï´Ù.


Assay Principle

Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÕ´Ï´Ù. ¼¼Æ÷¸· ¹«°á¼º¿¡ ±â¹ÝÇÏ¿© ¾à¹° ¶Ç´Â ȯ°æÀû ¿äÀÎÀ¸·Î ÀÎÇÑ ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» ½Ç½Ã°£À¸·Î ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â ¸Å¿ì ¹Î°¨Çϸç, ¼¼Æ÷¿¡ ÷°¡Çصµ ¼¼Æ÷ ¼ºÀåÀ̳ª ÇüÅ¿¡ °ÅÀÇ ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¡Áö ¾Ê½À´Ï´Ù. ±×·¯³ª ¼¼Æ÷ÀÇ ¼¼Æ÷¸·¿¡ ¼Õ»óÀÌ »ý°Ü Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á°¡ ¼¼Æ÷ ³»ºÎ·Î ħÅõÇÒ ¼ö ÀÖ°Ô µÇ¸é, ¿°·á°¡ DNA¿¡ °áÇÕÇϸ鼭 Çü±¤ÀÌ 100¹è¿¡¼­ 1,000¹è Áõ°¡ÇÕ´Ï´Ù (Figure 1).

½Ã°£ÀÌ Áö³²¿¡ µû¶ó Çü±¤À¸·Î Ç¥ÁöµÈ ³ì»ö, »¡°£»ö ¶Ç´Â ±ÙÀû¿Ü¼± (NIR) ÇÙÀÌ ³ªÅ¸³²À¸·Î½á »ç¸êÇÏ´Â ¼¼Æ÷¸¦ ½Äº°ÇÏ°í Á¤·®È­ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. Incucyte¢ç ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ ÅëÇØ Çü±¤ ¹°Ã¼´Â ÀÚµ¿À¸·Î Á¤·®È­µÇ¸ç, ¹è°æ Çü±¤Àº ÃÖ¼ÒÈ­µË´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ Incucyte¢ç HD À§»óÂ÷ À̹ÌÁö ¹× µ¿¿µ»óÀ» ÅëÇØ ¼¼Æ÷ÀÇ Morphology º¯È­ (¿¹: ¼¼Æ÷ °ñ°Ý ±¸Á¶ »ó½Ç, ¿îµ¿¼º °¨¼Ò)¸¦ ¹ÙÅÁÀ¸·Î ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù


[Figure 1] Live-Cell Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼® ¿ø¸®
¼¼Æ÷¸·À» Åë°úÇÏÁö ¸øÇÏ´Â DNA ¿°»ö¾àÀÎ Incucyte¢ç Cytotox ´Â ¼¼Æ÷°¡ Cytotoxic ¹°Áú¿¡ ÀÇÇØ ¼¼Æ÷¸·ÀÌ ¼Õ»óµÇ¾úÀ» ¶§¸¸ ¼¼Æ÷ ÇÙÀ» ¿°»öÇÕ´Ï´Ù. Necrosis ÀÇ Æ¯Â¡À¸·Î´Â ¼¼Æ÷ÁúÀÇ ÆØâ°ú ¼¼Æ÷¸· ¼Õ»óÀÌ Æ÷ÇԵ˴ϴÙ. »ýÁ¸ ¼¼Æ÷´Â Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿¡ ÀÇÇØ ¿°»öµÇÁö ¾ÊÀ¸¸ç, Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á°¡ ÀÖ´Â »óÅ¿¡¼­µµ ¼ºÀå¿¡ ¿µÇâÀ» ¹ÞÁö ¾Ê½À´Ï´Ù.



Materials and Methods

Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº °£´ÜÇÑ Mix-and-read ÇÁ·ÎÅäÄÝÀ» »ç¿ëÇÏ¿© È¿À²ÀûÀ¸·Î ¼öÇàÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù (Figure 2). ÀÌ ºÐ¼®¹ýÀº ¸Å¿ì À¯¿¬ÇÏ¿© ºÎÂø¼º ¼¼Æ÷ ¶Ç´Â ºñºÎÂø¼º ¼¼Æ÷ µî ¿øÇÏ´Â ¼¼Æ÷¸¦ »ç¿ëÇØ ºñħ½ÀÀûÀ¸·Î ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ó¸® È¿°ú¸¦ ½Ç½Ã°£À¸·Î Á¤·®È­ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â ÇÙ ¿°»öÀ» À§ÇÑ Incucyte¢ç Nuclight ½Ã¾à ¹× Incucyte¢ç Annexin V ¿°·á ¶Ç´Â Incucyte¢ç Caspase-3/7 ¿°·á¿Í °áÇÕÇÒ ¼ö ÀÖ¾î ¼¼Æ÷ Áõ½Ä°ú »ç¸êÀ» µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù


[Figure 2] ºÎÂø, ºñºÎÂø ¼¼Æ÷¿¡ ´ëÇÑ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ÇÁ·ÎÅäÄÝ ¸ð½Äµµ
ÇÁ·ÎÅäÄÝÀº Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÏ¿© À̹ÌÁö ±â¹Ý Çü±¤ ÃøÁ¤À» ÅëÇØ Cytotoxicity ¸¦ ÃøÁ¤ÇÕ´Ï´Ù.



Validation Data

Quantification of Cytotoxicity

Incucyte¢ç Live-Cell Analysis System°ú Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¸¦ ÇÔ²² »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¸¦ ½Ã°¢È­ÇÏ°í Á¤·®È­ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. Figure 3Àº ºñºÎÂø¼º ¸²ÇÁ¸ð±¸¼º ¹éÇ÷º´ ¼¼Æ÷ÁÖÀÎ Jurkat ÀÌ Ç×¾ÏÁ¦ Camptothecin (CMP) ¿¡ ¹ÝÀÀÇÏ´Â Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀ» ½Ç½Ã°£À¸·Î Á¤·®È­ÇÏ´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù. Jurkat ¼¼Æ÷¿¡´Â Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·á¿Í ÇÔ²² CMP 3 ¥ìM °¡ 󸮵ǾúÀ¸¸ç, 24½Ã°£ µ¿¾È Cytotox NIR ¿°·á°¡ Çٻ꿡 °áÇÕÇÏ´Â ¾çÀÌ Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀÌ °üÂûµÇ¾ú½À´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ À̹ÌÁö¸¦ ÅëÇØ Cytotoxicity ¿Í °ü·ÃµÈ Morphology º¯È­°¡ ¼¼Æ÷¸· ¼Õ»óÀ¸·Î ÀÎÇÑ °ÍÀ̸ç, ÀÌ´Â Jurkat ¼¼Æ÷ÀÇ »ç¸ê¿¡¼­ ³ªÅ¸³ª´Â ÀüÇüÀûÀÎ Halo È¿°ú·Î È®ÀεǾú½À´Ï´Ù


[Figure 3] ¾ÏÁ¦ Camptothecin ó¸®µÈ ºñºÎÂø¼º Jurkat ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÏ¿© ½Ç½Ã°£ ½Ã°¢È­ ¹× Á¤·®È­ÇÏ´Â ¸ð½À
Jurkat ¼¼Æ÷ (20,000 Cells/well)´Â Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·á¿Í ÇÔ²² 3 ¥ìM CMP·Î 󸮵Ǿú½À´Ï´Ù. ½ÇÇè ±â°£ µ¿¾È 20 ¹èÀ², 2 ½Ã°£ °£°ÝÀ¸·Î À̹ÌÁö¸¦ ÃÔ¿µÇÏ¿´½À´Ï´Ù. Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·áÀÇ ÇÙ»ê °áÇÕ Áõ°¡¸¦ NIR ¹°Ã¼ ¼ö·Î ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ¼¼Æ÷ »ç¸ê°ú °ü·ÃµÈ Morphology º¯È­¿Í ¿¬°üµÉ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù


ÀÌ ¹æ¹ýÀº Cytotoxicity ¸¦ È¿À²ÀûÀ̸ç Á¤·®ÀûÀ¸·Î ¿¬±¸ÇÏ´Â µ¥ À¯¿ëÇÏ°Ô »ç¿ëµÉ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. À̸¦ ÀÔÁõÇϱâ À§ÇØ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³× °¡Áö ´Ù¸¥ È­ÇÕ¹°ÀÇ Cytotoxicity ¸¦ Á¶»çÇß½À´Ï´Ù. ¼¼Æ÷´Â Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² 0.78ºÎÅÍ 50 ¥ìM ±îÁö ´Ù¾çÇÑ ³óµµÀÇ È­ÇÕ¹°À» ó¸®ÇÏ°í ÅëÇÕ ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇØ Çü±¤°ªÀ» ºÐ¼®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 4). °¢ Well ÀÇ µ¿Àû Çü±¤ º¯È­¸¦ 72½Ã°£ µ¿¾È ÃøÁ¤ÇÑ °á°ú (Figure 4A), Camptothecin (CMP) Àº Å×½ºÆ®ÇÑ ¸ðµç ³óµµ¿¡¼­ °­ÇÑ Cytotoxicity È¿°ú¸¦ º¸¿´½À´Ï´Ù.

±×¿¡ ¹ÝÇØ Cisplatin (CIS), Staurosporine (SSP) ¹× Nocodazole (NOC) Àº ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î Cytotoxicity È¿°ú¸¦ ³ªÅ¸³»¾ú½À´Ï´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ µ¥ÀÌÅÍ´Â Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay°¡ Cytotoxicity ÀÇ ½Ã°¢È­ ¹× Á¤·®¿¡ À¯¿ëÇϸç, ½Ç½Ã°£ ¼¼Æ÷ ºÐ¼®ÀÌ ¾à¸® ¿¬±¸¿¡ ¸Å¿ì È¿À²ÀûÀ̶ó´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù


[Figure 4] High-Throughput Cytotoxicity ÀÚµ¿ ºÐ¼®
HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (2,000 Cells/well)¿¡ Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í 4°¡ÁöÀÇ ¼­·Î ´Ù¸¥ È­ÇÕ¹°À» ó¸®Çß½À´Ï´Ù. (A) Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®Àº 96/384-Well Plate ÀÇ ¸ðµç Well À» ÀÚµ¿À¸·Î À̹ÌÁöÈ­ÇÏ°í ºÐ¼®ÇÏ¿© ½Ã°£¿¡ µû¸¥ Cytotoxicity °ªÀ» Á¦°øÇÕ´Ï´Ù. (B) ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¸¥ º¯È­¿Í 48½Ã°£ ½ÃÁ¡¿¡¼­ÀÇ ³óµµ-¹ÝÀÀ °î¼±Àº Cisplatin (CIS; 50 - 0.78 ¥ìM) ÀÌ HT-1080 ¼¼Æ÷¿¡ ¹ÌÄ¡´Â È¿°ú°¡ ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀÓÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù



Profiling of Single Compounds Across Multiple Cancer Cell Types

Camptothecin (CMP) Àº DNA È¿¼ÒÀÎ Topoisomerase I (TOPO I) À» ¾ïÁ¦ÇÏ¿© ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ´Â È­ÇÕ¹°·Î Cytotoxicity ¿¬±¸¿¡ ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â È­ÇÕ¹°ÀÔ´Ï´Ù. ¾à¸®ÇÐÀû ¿¬±¸¿¡¼­ ¼¼ °¡Áö ´Ù¸¥ ¾Ï¼¼Æ÷ÁÖ, A549, SKOV3, MDA-MB-231 ¸¦ ´ë»óÀ¸·Î CMP ¸¦ ó¸®ÇÑ ÈÄ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ÀÇ Cytotoxicity Æò°¡ ´É·ÂÀ» È®ÀÎÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 5A).

½Ã°£¿¡ µû¸¥ Cytotoxicity Á¤·® °á°ú A549 ¼¼Æ÷¿¡¼­ °¡Àå °­ÇÑ Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀÌ ³ªÅ¸³µÀ¸¸ç, SKOV3¿Í MDA-MB-231Àº °¢°¢ ³·Àº ¼öÁØÀÇ Çü±¤ÀÌ °üÂûµÇ¾ú½À´Ï´Ù (Figure 5B).

¶ÇÇÑ, 72½Ã°£ ÈÄÀÇ ³óµµ¿¡ µû¸¥ ¹ÝÀÀ °î¼±°ú ±×°ÍÀ» ÅëÇØ À¯µµµÈ EC50 °ªÀ» ÅëÇØ Cytotoxicity ¸¦ Á÷Á¢ ºñ±³ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú½À´Ï´Ù (Figure 5C).

º» ½ÇÇè °á°ú´Â CMP ÀÇ Cytotoxicity È¿°ú°¡ ¾Ï¼¼Æ÷ÁÖ ¸¶´Ù ´Ù¸£´Ù´Â °ÍÀ¸·Î º¸¿©ÁÖ¸ç, Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay °¡ °­·ÂÇÑ ½Ç½Ã°£ ¼¼Æ÷ ºÐ¼®¹ýÀ» Á¦°ø ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.


[Figure 5] ´Ù¾çÇÑ ¾Ï ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡¼­ÀÇ Ä¡·á È¿°ú ºÐ¼®
Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² Camptothecin (CMP) À» 10?0.16 ¥ìMÀÇ ´Ù¾çÇÑ ³óµµ·Î ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù. (A) À§»ó ¹× Çü±¤ À̹ÌÁö´Â CMP (1.25 ¥ìM) ó¸®µÈ ¼¼Æ÷¿Í Vehicle·Î ó¸®µÈ ¼¼Æ÷ÀÇ 72½Ã°£ ÈÄÀÇ Cytotox Çü±¤ ¹× Morphology º¯È­¸¦ º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù. (B) °¢ ¼¼Æ÷ÁÖ º° ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¸¥ CMPÀÇ Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀ» Green Object Count ·Î ÃøÁ¤ÇÑ °á°úÀÔ´Ï´Ù. (C) ³óµµ-¹ÝÀÀ °î¼± (72½Ã°£)À¸·Î º¯È¯µÈ µ¥ÀÌÅÍ´Â ¼¼Æ÷ÁÖ °£ÀÇ ¾à¸®ÇÐÀû ºñ±³¸¦ °¡´ÉÇÏ°Ô ÇÕ´Ï´Ù



Multiplexed Measurements of Proliferation and Cytotoxicity

Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â Incucyte¢ç Nuclight Reagents ¿Í °áÇÕÇÏ¿© ÇÙÀ» Ç¥ÁöÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. À̸¦ ÅëÇØ Incucyte¢ç Live-Cell Analysis SystemÀ» »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¿Í Cell Proliferation À» µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ¿©±â¿¡¼­´Â Incucyte¢ç Nuclight Red HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¿¡ ´Ü°èÀûÀ¸·Î Èñ¼®ÇÑ CMP¿Í Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¸¦ ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 6). Time-lapse À̹ÌÁö´Â CMP ó¸® ÈÄ ºÓÀº»ö ÇÙ Çü±¤ÀÌ °¨¼ÒÇÏ´Â °Í°ú µ¿½Ã¿¡ Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·áÀÇ ÇÙ»ê °áÇÕÀÌ Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù. Incucyte¢ç ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³ì»ö Çü±¤ ½ÅÈ£¸¦ ÅëÇØ ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» Á¤·®ÇÏ°í, ºÓÀº»ö Çü±¤À» ¸ð´ÏÅ͸µÇÏ¿© ¼¼Æ÷ Áõ½ÄÀ» ÃßÀûÇß½À´Ï´Ù. Á¤·® °á°ú CMP´Â ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î Cell Proliferation À» ¾ïÁ¦ÇÏ°í Cytotoxicity ¸¦ Áõ°¡½ÃÄ×½À´Ï´Ù ÀÌ·¯ÇÑ µ¥ÀÌÅÍ´Â ´ÙÁß ¸Å°³ º¯¼ö¸¦ ÅëÇÑ ºÐ¼®ÀÌ ½Å¾à °³¹ß¿¡ À¯¿ëÇÏ´Ù´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.


[Figure 6] È­ÇÕ¹° È¿°ú Æò°¡¸¦ À§ÇÑ ´ÙÁß ¼¼Æ÷µ¶¼º ÃøÁ¤ ¹× »ý¼¼Æ÷ °è¼ö
Incucyte¢ç Nuclight Red Lentivirus ·Î ¹Ì¸® Ç¥ÁöµÈ HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (5,000 Cells/well)¿¡ Camptothecin (CMP; 33.3?0.001 ¥ìM)À» ó¸®ÇÑ ÈÄ Incucyte¢ç Cytotox Green Dye ÀÇ Á¸Àç ÇÏ¿¡ »ì¾ÆÀÖ´Â ¼¼Æ÷¿Í »ç¸êÇÑ ¼¼Æ÷¸¦ ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¶ó °ËÃâÇß½À´Ï´Ù.



Subpopulation Analysis of Cytotoxic and Cytostatic Treatment Effects

Incucyte¢ç Cell-by-Cell Analysis Software ModuleÀº À§»óÂ÷ À̹ÌÁö¿¡¼­ °³º° ¼¼Æ÷¸¦ ºÐÇÒÇÏ°í, ºÐÇÒµÈ °æ°è ³»¿¡¼­ Çü±¤°ú °ü·ÃµÈ ÁöÇ¥¸¦ ¼¼Æ÷º°·Î ÃßÃâÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇÏ¿©, ¼¼Æ÷ Áý´ÜÀº Çü±¤ Ư¼ºÀ» ±âÁØÀ¸·Î ºÐ·ùÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ¿©±â¿¡¼­´Â µÎ °¡Áö ´Ù¸¥ ±âÀüÀ» °¡Áø È­ÇÕ¹°µéÀÌ Àüü ¼¼Æ÷ Áý´Ü¿¡ ¹ÌÄ¡´Â ¿µÇâÀ» °üÂûÇÏ¿´½À´Ï´Ù.

Proliferation À» ÅëÇÑ ¼¼Æ÷ ¼öÀÇ Áõ°¡´Â Label-free, Cytotoxicity ´Â Cytotox Dye fluorescence classification À» »ç¿ëÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 7). ½ÇÇèÀ» À§ÇØ µÎ °¡Áö ¾à¹° (Camptothecin (CMP), Cycloheximide (CHX)) ÀÌ »ç¿ëµÇ¾ú½À´Ï´Ù. DNA ÇÕ¼ºÀ» ÀúÇØÇÏ´Â CMP ´Â ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ´Â Cytotoxic È­ÇÕ¹°·Î ¿¹ÃøµÇ¸ç, ´Ü¹éÁú ÇÕ¼ºÀ» ÀúÇØÇÏ´Â CHX ´Â ¼¼Æ÷ÀÇ »ýÁ¸¿¡´Â ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¡Áö ¾Ê°í Áõ½ÄÀ» ¾ïÁ¦ÇÒ °ÍÀ¸·Î ¿¹»óµÇ¾ú½À´Ï´Ù.

ÀÌ µÎ ¾à¹° (10?0.004 ¥ìM) À» Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¿¡ ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù. ¼¼Æ÷ÀÇ ÇÏÀ§ Áý´ÜÀº Cell-by-Cell Analysis Software¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³ì»ö Çü±¤À» ±âÁØÀ¸·Î ºÐ·ùÇÏ¿´À¸¸ç, °¢ ¾à¹°ÀÇ À§»ó À̹ÌÁö¿Í È¥ÇÕ Çü±¤ À̹ÌÁö´Â ¼¼Æ÷°¡ ¾î¶»°Ô »ýÁ¸ ¶Ç´Â »ç¸ê »óÅ (³ì»ö) ·Î ºÐ·ùµÇ´ÂÁö º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.

¼¼Æ÷¼ö °è»ê (Label-free) ¹× Cytotoxicity Áö¼öÀÇ °è»ê (Àüü ¼¼Æ÷ Áß »ç¸êÇÑ ¼¼Æ÷ÀÇ ºñÀ²) Àº Incucyte¢ç ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¿¡¼­ ¼öÇàµÇ¾úÀ¸¸ç, µÎ ¾à¹°ÀÌ Proliferation °ú Cytotoxicity ¿¡ ¹ÌÄ¡´Â È¿°ú°¡ Â÷µîÀûÀÓÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.

CMP´Â ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î HT-1080 ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ¿© Cytotoxic ¸ÞÄ¿´ÏÁòÀÌ ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÖ°í ÀÖ½À´Ï´Ù. ¹Ý¸é, CHX ´Â Åë°èÀûÀ¸·Î À¯ÀÇÇÑ Cytotoxicity °¡ °üÂûµÇÁö ¾Ê¾ÒÀ¸¸ç, ´ë½Å ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î ¼¼Æ÷ Áõ½ÄÀ» ¾ïÁ¦ÇÏ°í ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.

°á·ÐÀûÀ¸·Î ÀÌ Á¢±Ù¹ýÀº ¾à¹° À¯µµ Ä¡·á È¿°ú¿Í ÀÛ¿ë ±âÀü¿¡ ´ëÇÑ ÅëÂû·ÂÀ» Á¦°øÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.


[Figure 7] Live-Cell Label free ¼¼Æ÷ ¹× Cytotox Æǵ¶À» ÅëÇÑ ¼¼Æ÷ ¾ÆÇü Áý´Ü¿¡¼­ÀÇ ¾à¹° ¸ÞÄ¿´ÏÁò Á¶»ç
HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (5,000 Cells/well)´Â Camptothecin (CMP; Cytotoxicity) ¶Ç´Â Cycloheximide (CHX; Cytostatic) ·Î 󸮵ǾúÀ¸¸ç, Incucyte¢ç Cytotox Green Dye ¿Í ÇÔ²² »ç¿ëµÇ¾ú½À´Ï´Ù. À§»ó ¹× Çü±¤ À̹ÌÁö¸¦ ÅëÇØ ¼¼Æ÷ º°·Î 24½Ã°£ ÈÄ »ýÁ¸ / »ç¸ê ¿©ºÎ¸¦ °¨ÁöÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.



Summary and Outlook

¼¼Æ÷ »ç¸êÀº µ¿Àû °úÁ¤À̸ç, Cytotoxicity ¸¦ ¸ð´ÏÅ͸µÇÏ´Â °ÍÀº Á¾¾çÇаú °°Àº ¸¹Àº Ä¡·á ºÐ¾ß¿¡¼­ Áß¿äÇÕ´Ï´Ù. Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛ°ú Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¸¦ ½Ç½Ã°£ µ¿Àû ºÐ¼®ÇÑ °á°ú, ¼¼Æ÷ »ç¸êÀÇ Æ¯Â¡ÀÎ ¼¼Æ÷ Åõ°ú¼ºÀ» Á¤·®ÀûÀ¸·Î ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» È®ÀÎÇÏ¿´À¸¸ç, »ý¸®ÇÐÀûÀÎ Á¶°Ç¿¡¼­ Morphology º¯È­¸¦ ¸ð´ÏÅ͸µÇϸ鼭 µ¿½Ã¿¡ Á¤·®È­ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.

Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Nuclight ½Ã¾à ¶Ç´Â ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ °áÇÕÇÏ¿© Proliferation °ú Cytotoxicity ¸¦ ´ÙÁß ºÐ¼®ÇÒ ¼öµµ ÀÖÀ¸¸ç, Incucyte¢ç Cell-by-Cell ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ ÅëÇØ °³º° ¼¼Æ÷¸¦ Çü±¤ ±â¹ÝÀ¸·Î ºÐ·ùÇÏ¿© Cytotoxicity Áö¼ö ¶Ç´Â Apoptosis Áö¼ö¿Í °°Àº Ãß°¡ ¸Å°³º¯¼ö¸¦ °è»êÇÏ¿© ¼¼Æ÷ Áý´Ü¿¡ ´ëÇÑ ¾à¹°ÀÇ ÀÛ¿ë ±âÀüÀ» Æò°¡ÇÒ ¼öµµ ÀÖ½À´Ï´Ù.

Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ´Â ¾à¸®ÇÐÀû ¿¬±¸¿¡ ÀûÇÕÇÑ °­·ÂÇÏ°í À¯¿¬ÇÑ µµ±¸À̸ç, ½Ã°£¿¡ µû¸¥ ¼¼Æ÷ »ç¸ê ÆÐÅÏ¿¡ ´ëÇÑ ´õ ±íÀº ÅëÂû·ÂÀ» Á¦°øÇÕ´Ï´Ù.







 
(ÁÖ)¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç   |   ´ëÇ¥ : ÀÌÇü¿­   |   »ç¾÷ÀÚµî·Ï¹øÈ£ : 138-81-34745
±º Æ÷ º» »ç   |   (15853) °æ±âµµ ±ºÆ÷½Ã ÇѼ¼·Î 48 ³²¿øºôµù 2Ãþ   |   ÀüÈ­ : 1577-7956 (1)   |   Æѽº : 031-457-9188   |   À̸ÞÀÏ : info@yjcorp.co.kr
´ë Àü Áö »ç   |   (34036) ´ëÀü½Ã À¯¼º±¸ Å×Å©³ë10·Î 29 ÆÄÅ©ÆÓ¸®½º 2Ãþ   |   ÀüÈ­ : 1577-7956 (2)   |   Æѽº : 042-932-1266   |   À̸ÞÀÏ : info@yjcorp.co.kr