Phone |
|
|
  ´ëÇ¥ÀüÈ |
1577-7956   |
  º»     »ç |
031-457-9187   |
  ´ë     Àü |
042-932-1265 |
|
|
Web Site Visitors |
|
|
  Today |
645     |
  Yesterday |
948     |
  Since 2006 |
1,934,206     |
|
|
|
|
¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç Á¾ÇÕÄ«´Ù·Î±× |
|
|
Introduction
¼¼Æ÷°¡ Cytotoxicity Àڱؿ¡ ³ëÃâµÇ¸é ´ë»ç È°µ¿À̳ª ¼ºÀåÀÌ ÀúÇØµÉ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ±Ã±ØÀûÀ¸·Î´Â Necrosis ³ª Apoptosis ¿Í °°Àº ¼¼Æ÷ »ç¸ê¿¡ À̸£°Ô µË´Ï´Ù.
¶ÇÇÑ, Cytotoxic ÈÇÕ¹°Àº Á¾Á¾ ±âÀü¿¡ »ó°ü¾øÀÌ ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¼Õ»óÀ» À¯¹ßÇϸç, ¼¼Æ÷¸·ÀÌ È¸º¹µÉ ¼ö ¾øÀ» Á¤µµ·Î ¼Õ»óÀ» ÀÔ°Ô µÇ¸é °á±¹ »ç¸êµË´Ï´Ù.
Apoptosis µ¿¾È¿¡´Â Pseudopodia ÀÇ ¼öÃà, Pyknosis, Karyorrhexis, ±×¸®°í ±Ã±ØÀûÀ¸·Î´Â ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¹«°á¼º »ó½Ç°ú °°Àº Morphology º¯È°¡ ÀϾ´Ï´Ù.
Necrosis ¸¦ Ư¡Áþ´Â Morphology º¯È´Â ¼¼Æ÷Áú ºÎÁ¾°ú Ãʱ⠼¼Æ÷¸· ÆÄ¿ÀÌ Æ÷ÇԵ˴ϴÙ.
Cytotoxicity ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ´Â ºÐ¼®¹ýÀº ƯÁ¤ Á¶Á÷¿¡ ´ëÇÑ µ¶¼ºÀ» ¿¹ÃøÇϰųª Ç×¾Ï Ä¡·áÁ¦¸¦ ã°í ºÐ·ùÇÏ´Â µ¥ »ç¿ëµË´Ï´Ù.
ÀÇ·á±â±âÀÇ »ýü ÀûÇÕ¼º ¿ª½Ã Cytotoxicity ºÐ¼®À» ÅëÇØ ÀÌ·ç¾îÁö¸ç, Incucyte¢ç Cytotoxicity ÀÇ ¼¼Æ÷ ±â¹Ý Cytotoxicity Å×½ºÆ®·Î Æò°¡ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÀϹÝÀûÀ¸·Î »ç¿ëµÇ´Â Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº ¿©·¯°¡Áö ¿ä¼Ò¸¦ µ¿½Ã¿¡ Æò°¡ÇÕ´Ï´Ù. ¼¼Æ÷¸·ÀÌ ÆÄ¿µÈ ÈÄ ¹æÃâµÇ´Â Lactate dehydrogenase (LDH) È¿¼Ò¿Í
Glutathione (GSH), Reactive oxygen species (ROS) ÀÇ »ý¼º, Cell proliferation, ±×¸®°í ¹ÌÅäÄܵ帮¾Æ ¸· ÀüÀ§ÀÇ Æı«¿Í °°Àº ´Ù¾çÇÑ ÃÖÁ¾ ´ë»ç È°µ¿ ÃøÁ¤ÀÌ Æ÷ÇԵǸç,
¼¼Æ÷¸· Æı« ¿©ºÎ¸¦ Æò°¡Çϱâ À§ÇØ Propidium iodide ³ª Çü±¤ Çö¹Ì°æ, À¯¼¼Æ÷ ºÐ¼®À» À§ÇÑ ±âŸ ¿°»öÁ¦°¡ »ç¿ëµË´Ï´Ù.
ÀÌ·¯ÇÑ ºÐ¼®¹ýÀÇ Áß¿äÇÑ ¿ä¼Ò·Î´Â ÈÇÕ¹°ÀÇ ³óµµ¿Í, ÈÇÕ¹°ÀÌ È¿°ú¸¦ ³ªÅ¸³»´Â µ¥ °É¸®´Â ½Ã°£ÀÌ ÀÖ½À´Ï´Ù.
Multiplex ºÐ¼®¹ýÀº ¿©·¯ °¡Áö Cytotoxicity ÁöÇ¥¸¦ µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖÁö¸¸, ÀϹÝÀûÀ¸·Î ÇÑ ½ÃÁ¡¿¡¼¸¸ Æò°¡°¡ ÀÌ·ç¾îÁö±â ¶§¹®¿¡ ½Ã°£¿¡ µû¶ó
»ý¹°ÇÐÀû È°µ¿ÀÌ ¾î¶»°Ô º¯ÈÇÏ´ÂÁö Æò°¡ÇÏÁö´Â ¸øÇÕ´Ï´Ù. ¼¼Æ÷¸·ÀÇ ¼Õ»ó ¿©ºÎ¸¦ µ¿ÀûÀ¸·Î ÃøÁ¤Çϱâ À§ÇØ ½Ç½Ã°£À¸·Î ¼¼Æ÷¸¦ ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¹æ¹ýÀÌ °³¹ßµÇ¾úÁö¸¸,
Á¤È®ÇÑ Æò°¡¸¦ À§Çؼ´Â ÃÖÀûÈµÈ ±â¼ú°ú ½Ã¾àÀÌ ÇÊ¿äÇÕ´Ï´Ù.
º» ³ëÆ®¿¡¼´Â ¼¼Ã´ ¾øÀÌ »ç¿ë °¡´ÉÇÑ Mix-and-read ½Ã¾à°ú ÅëÇÕµÈ À̹ÌÁö ±â¹Ý ºÐ¼® µµ±¸¸¦ È°¿ëÇÑ Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀÇ À¯¿ë¼ºÀ» ¼³¸íÇÕ´Ï´Ù.
Assay Principle
Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÕ´Ï´Ù.
¼¼Æ÷¸· ¹«°á¼º¿¡ ±â¹ÝÇÏ¿© ¾à¹° ¶Ç´Â ȯ°æÀû ¿äÀÎÀ¸·Î ÀÎÇÑ ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» ½Ç½Ã°£À¸·Î ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â ¸Å¿ì ¹Î°¨Çϸç, ¼¼Æ÷¿¡ ÷°¡Çصµ ¼¼Æ÷ ¼ºÀåÀ̳ª ÇüÅ¿¡ °ÅÀÇ ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¡Áö ¾Ê½À´Ï´Ù.
±×·¯³ª ¼¼Æ÷ÀÇ ¼¼Æ÷¸·¿¡ ¼Õ»óÀÌ »ý°Ü Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á°¡ ¼¼Æ÷ ³»ºÎ·Î ħÅõÇÒ ¼ö ÀÖ°Ô µÇ¸é, ¿°·á°¡ DNA¿¡ °áÇÕÇÏ¸é¼ Çü±¤ÀÌ 100¹è¿¡¼ 1,000¹è Áõ°¡ÇÕ´Ï´Ù (Figure 1).
½Ã°£ÀÌ Áö³²¿¡ µû¶ó Çü±¤À¸·Î Ç¥ÁöµÈ ³ì»ö, »¡°£»ö ¶Ç´Â ±ÙÀû¿Ü¼± (NIR) ÇÙÀÌ ³ªÅ¸³²À¸·Î½á »ç¸êÇÏ´Â ¼¼Æ÷¸¦ ½Äº°ÇÏ°í Á¤·®ÈÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
Incucyte¢ç ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ ÅëÇØ Çü±¤ ¹°Ã¼´Â ÀÚµ¿À¸·Î Á¤·®ÈµÇ¸ç, ¹è°æ Çü±¤Àº ÃÖ¼Òȵ˴ϴÙ.
¶ÇÇÑ Incucyte¢ç HD À§»óÂ÷ À̹ÌÁö ¹× µ¿¿µ»óÀ» ÅëÇØ ¼¼Æ÷ÀÇ Morphology º¯È (¿¹: ¼¼Æ÷ °ñ°Ý ±¸Á¶ »ó½Ç, ¿îµ¿¼º °¨¼Ò)¸¦ ¹ÙÅÁÀ¸·Î ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù
[Figure 1] Live-Cell Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼® ¿ø¸®
¼¼Æ÷¸·À» Åë°úÇÏÁö ¸øÇÏ´Â DNA ¿°»ö¾àÀÎ Incucyte¢ç Cytotox ´Â ¼¼Æ÷°¡ Cytotoxic ¹°Áú¿¡ ÀÇÇØ ¼¼Æ÷¸·ÀÌ ¼Õ»óµÇ¾úÀ» ¶§¸¸ ¼¼Æ÷ ÇÙÀ» ¿°»öÇÕ´Ï´Ù.
Necrosis ÀÇ Æ¯Â¡À¸·Î´Â ¼¼Æ÷ÁúÀÇ ÆØâ°ú ¼¼Æ÷¸· ¼Õ»óÀÌ Æ÷ÇԵ˴ϴÙ. »ýÁ¸ ¼¼Æ÷´Â Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿¡ ÀÇÇØ ¿°»öµÇÁö ¾ÊÀ¸¸ç, Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á°¡ ÀÖ´Â »óÅ¿¡¼µµ
¼ºÀå¿¡ ¿µÇâÀ» ¹ÞÁö ¾Ê½À´Ï´Ù.
Materials and Methods
Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®¹ýÀº °£´ÜÇÑ Mix-and-read ÇÁ·ÎÅäÄÝÀ» »ç¿ëÇÏ¿© È¿À²ÀûÀ¸·Î ¼öÇàÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù (Figure 2).
ÀÌ ºÐ¼®¹ýÀº ¸Å¿ì À¯¿¬ÇÏ¿© ºÎÂø¼º ¼¼Æ÷ ¶Ç´Â ºñºÎÂø¼º ¼¼Æ÷ µî ¿øÇÏ´Â ¼¼Æ÷¸¦ »ç¿ëÇØ ºñħ½ÀÀûÀ¸·Î ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ó¸® È¿°ú¸¦ ½Ç½Ã°£À¸·Î Á¤·®ÈÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
¶ÇÇÑ Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â ÇÙ ¿°»öÀ» À§ÇÑ Incucyte¢ç Nuclight ½Ã¾à ¹× Incucyte¢ç Annexin V ¿°·á ¶Ç´Â Incucyte¢ç Caspase-3/7 ¿°·á¿Í °áÇÕÇÒ ¼ö ÀÖ¾î
¼¼Æ÷ Áõ½Ä°ú »ç¸êÀ» µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù
[Figure 2] ºÎÂø, ºñºÎÂø ¼¼Æ÷¿¡ ´ëÇÑ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ÇÁ·ÎÅäÄÝ ¸ð½Äµµ
ÇÁ·ÎÅäÄÝÀº Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÏ¿© À̹ÌÁö ±â¹Ý Çü±¤ ÃøÁ¤À» ÅëÇØ Cytotoxicity ¸¦ ÃøÁ¤ÇÕ´Ï´Ù.
Validation Data
Quantification of Cytotoxicity
Incucyte¢ç Live-Cell Analysis System°ú Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¸¦ ÇÔ²² »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¸¦ ½Ã°¢ÈÇÏ°í Á¤·®ÈÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. Figure 3Àº ºñºÎÂø¼º ¸²ÇÁ¸ð±¸¼º
¹éÇ÷º´ ¼¼Æ÷ÁÖÀÎ Jurkat ÀÌ Ç×¾ÏÁ¦ Camptothecin (CMP) ¿¡ ¹ÝÀÀÇÏ´Â Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀ» ½Ç½Ã°£À¸·Î Á¤·®ÈÇÏ´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
Jurkat ¼¼Æ÷¿¡´Â Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·á¿Í ÇÔ²² CMP 3 ¥ìM °¡ 󸮵ǾúÀ¸¸ç, 24½Ã°£ µ¿¾È Cytotox NIR ¿°·á°¡ Çٻ꿡 °áÇÕÇÏ´Â ¾çÀÌ Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀÌ °üÂûµÇ¾ú½À´Ï´Ù.
¶ÇÇÑ À̹ÌÁö¸¦ ÅëÇØ Cytotoxicity ¿Í °ü·ÃµÈ Morphology º¯È°¡ ¼¼Æ÷¸· ¼Õ»óÀ¸·Î ÀÎÇÑ °ÍÀ̸ç, ÀÌ´Â Jurkat ¼¼Æ÷ÀÇ »ç¸ê¿¡¼ ³ªÅ¸³ª´Â ÀüÇüÀûÀÎ Halo È¿°ú·Î È®ÀεǾú½À´Ï´Ù
[Figure 3] ¾ÏÁ¦ Camptothecin ó¸®µÈ ºñºÎÂø¼º Jurkat ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛÀ» »ç¿ëÇÏ¿© ½Ç½Ã°£ ½Ã°¢È ¹× Á¤·®ÈÇÏ´Â ¸ð½À
Jurkat ¼¼Æ÷ (20,000 Cells/well)´Â Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·á¿Í ÇÔ²² 3 ¥ìM CMP·Î 󸮵Ǿú½À´Ï´Ù.
½ÇÇè ±â°£ µ¿¾È 20 ¹èÀ², 2 ½Ã°£ °£°ÝÀ¸·Î À̹ÌÁö¸¦ ÃÔ¿µÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
Incucyte¢ç Cytotox NIR ¿°·áÀÇ ÇÙ»ê °áÇÕ Áõ°¡¸¦ NIR ¹°Ã¼ ¼ö·Î ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ¼¼Æ÷ »ç¸ê°ú °ü·ÃµÈ Morphology º¯È¿Í ¿¬°üµÉ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù
ÀÌ ¹æ¹ýÀº Cytotoxicity ¸¦ È¿À²ÀûÀ̸ç Á¤·®ÀûÀ¸·Î ¿¬±¸ÇÏ´Â µ¥ À¯¿ëÇÏ°Ô »ç¿ëµÉ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
À̸¦ ÀÔÁõÇϱâ À§ÇØ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³× °¡Áö ´Ù¸¥ ÈÇÕ¹°ÀÇ Cytotoxicity ¸¦ Á¶»çÇß½À´Ï´Ù.
¼¼Æ÷´Â Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² 0.78ºÎÅÍ 50 ¥ìM ±îÁö ´Ù¾çÇÑ ³óµµÀÇ ÈÇÕ¹°À» ó¸®ÇÏ°í ÅëÇÕ ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇØ Çü±¤°ªÀ» ºÐ¼®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 4).
°¢ Well ÀÇ µ¿Àû Çü±¤ º¯È¸¦ 72½Ã°£ µ¿¾È ÃøÁ¤ÇÑ °á°ú (Figure 4A), Camptothecin (CMP) Àº Å×½ºÆ®ÇÑ ¸ðµç ³óµµ¿¡¼ °ÇÑ Cytotoxicity È¿°ú¸¦ º¸¿´½À´Ï´Ù.
±×¿¡ ¹ÝÇØ Cisplatin (CIS), Staurosporine (SSP) ¹× Nocodazole (NOC) Àº ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î Cytotoxicity È¿°ú¸¦ ³ªÅ¸³»¾ú½À´Ï´Ù.
ÀÌ·¯ÇÑ µ¥ÀÌÅÍ´Â Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay°¡ Cytotoxicity ÀÇ ½Ã°¢È ¹× Á¤·®¿¡ À¯¿ëÇϸç, ½Ç½Ã°£ ¼¼Æ÷ ºÐ¼®ÀÌ ¾à¸® ¿¬±¸¿¡ ¸Å¿ì È¿À²ÀûÀ̶ó´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù
[Figure 4] High-Throughput Cytotoxicity ÀÚµ¿ ºÐ¼®
HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (2,000 Cells/well)¿¡ Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í 4°¡ÁöÀÇ ¼·Î ´Ù¸¥ ÈÇÕ¹°À» ó¸®Çß½À´Ï´Ù.
(A) Incucyte¢ç Cytotoxicity ºÐ¼®Àº 96/384-Well Plate ÀÇ ¸ðµç Well À» ÀÚµ¿À¸·Î À̹ÌÁöÈÇÏ°í ºÐ¼®ÇÏ¿© ½Ã°£¿¡ µû¸¥ Cytotoxicity °ªÀ» Á¦°øÇÕ´Ï´Ù.
(B) ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¸¥ º¯È¿Í 48½Ã°£ ½ÃÁ¡¿¡¼ÀÇ ³óµµ-¹ÝÀÀ °î¼±Àº Cisplatin (CIS; 50 - 0.78 ¥ìM) ÀÌ HT-1080 ¼¼Æ÷¿¡ ¹ÌÄ¡´Â È¿°ú°¡ ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀÓÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù
Profiling of Single Compounds Across Multiple Cancer Cell Types
Camptothecin (CMP) Àº DNA È¿¼ÒÀÎ Topoisomerase I (TOPO I) À» ¾ïÁ¦ÇÏ¿© ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ´Â ÈÇÕ¹°·Î Cytotoxicity ¿¬±¸¿¡ ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â ÈÇÕ¹°ÀÔ´Ï´Ù.
¾à¸®ÇÐÀû ¿¬±¸¿¡¼ ¼¼ °¡Áö ´Ù¸¥ ¾Ï¼¼Æ÷ÁÖ, A549, SKOV3, MDA-MB-231 ¸¦ ´ë»óÀ¸·Î CMP ¸¦ ó¸®ÇÑ ÈÄ Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ÀÇ Cytotoxicity Æò°¡ ´É·ÂÀ» È®ÀÎÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 5A).
½Ã°£¿¡ µû¸¥ Cytotoxicity Á¤·® °á°ú A549 ¼¼Æ÷¿¡¼ °¡Àå °ÇÑ Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀÌ ³ªÅ¸³µÀ¸¸ç, SKOV3¿Í MDA-MB-231Àº °¢°¢ ³·Àº ¼öÁØÀÇ Çü±¤ÀÌ °üÂûµÇ¾ú½À´Ï´Ù (Figure 5B).
¶ÇÇÑ, 72½Ã°£ ÈÄÀÇ ³óµµ¿¡ µû¸¥ ¹ÝÀÀ °î¼±°ú ±×°ÍÀ» ÅëÇØ À¯µµµÈ EC50 °ªÀ» ÅëÇØ Cytotoxicity ¸¦ Á÷Á¢ ºñ±³ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú½À´Ï´Ù (Figure 5C).
º» ½ÇÇè °á°ú´Â CMP ÀÇ Cytotoxicity È¿°ú°¡ ¾Ï¼¼Æ÷ÁÖ ¸¶´Ù ´Ù¸£´Ù´Â °ÍÀ¸·Î º¸¿©ÁÖ¸ç, Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay °¡ °·ÂÇÑ ½Ç½Ã°£ ¼¼Æ÷ ºÐ¼®¹ýÀ» Á¦°ø ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
[Figure 5] ´Ù¾çÇÑ ¾Ï ¼¼Æ÷ÁÖ¿¡¼ÀÇ Ä¡·á È¿°ú ºÐ¼®
Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² Camptothecin (CMP) À» 10?0.16 ¥ìMÀÇ ´Ù¾çÇÑ ³óµµ·Î ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
(A) À§»ó ¹× Çü±¤ À̹ÌÁö´Â CMP (1.25 ¥ìM) ó¸®µÈ ¼¼Æ÷¿Í Vehicle·Î ó¸®µÈ ¼¼Æ÷ÀÇ 72½Ã°£ ÈÄÀÇ Cytotox Çü±¤ ¹× Morphology º¯È¸¦ º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
(B) °¢ ¼¼Æ÷ÁÖ º° ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¸¥ CMPÀÇ Cytotoxicity ¹ÝÀÀÀ» Green Object Count ·Î ÃøÁ¤ÇÑ °á°úÀÔ´Ï´Ù.
(C) ³óµµ-¹ÝÀÀ °î¼± (72½Ã°£)À¸·Î º¯È¯µÈ µ¥ÀÌÅÍ´Â ¼¼Æ÷ÁÖ °£ÀÇ ¾à¸®ÇÐÀû ºñ±³¸¦ °¡´ÉÇÏ°Ô ÇÕ´Ï´Ù
Multiplexed Measurements of Proliferation and Cytotoxicity
Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á´Â Incucyte¢ç Nuclight Reagents ¿Í °áÇÕÇÏ¿© ÇÙÀ» Ç¥ÁöÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. À̸¦ ÅëÇØ Incucyte¢ç Live-Cell Analysis SystemÀ» »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¿Í Cell Proliferation À» µ¿½Ã¿¡ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù. ¿©±â¿¡¼´Â Incucyte¢ç Nuclight Red HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¿¡ ´Ü°èÀûÀ¸·Î Èñ¼®ÇÑ CMP¿Í Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¸¦ ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 6). Time-lapse À̹ÌÁö´Â CMP ó¸® ÈÄ ºÓÀº»ö ÇÙ Çü±¤ÀÌ °¨¼ÒÇÏ´Â °Í°ú µ¿½Ã¿¡ Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·áÀÇ ÇÙ»ê °áÇÕÀÌ Áõ°¡ÇÏ´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù. Incucyte¢ç ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³ì»ö Çü±¤ ½ÅÈ£¸¦ ÅëÇØ ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» Á¤·®ÇÏ°í, ºÓÀº»ö Çü±¤À» ¸ð´ÏÅ͸µÇÏ¿© ¼¼Æ÷ Áõ½ÄÀ» ÃßÀûÇß½À´Ï´Ù. Á¤·® °á°ú CMP´Â ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î Cell Proliferation À» ¾ïÁ¦ÇÏ°í Cytotoxicity ¸¦ Áõ°¡½ÃÄ×½À´Ï´Ù
ÀÌ·¯ÇÑ µ¥ÀÌÅÍ´Â ´ÙÁß ¸Å°³ º¯¼ö¸¦ ÅëÇÑ ºÐ¼®ÀÌ ½Å¾à °³¹ß¿¡ À¯¿ëÇÏ´Ù´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
[Figure 6] ÈÇÕ¹° È¿°ú Æò°¡¸¦ À§ÇÑ ´ÙÁß ¼¼Æ÷µ¶¼º ÃøÁ¤ ¹× »ý¼¼Æ÷ °è¼ö
Incucyte¢ç Nuclight Red Lentivirus ·Î ¹Ì¸® Ç¥ÁöµÈ HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (5,000 Cells/well)¿¡ Camptothecin (CMP; 33.3?0.001 ¥ìM)À» ó¸®ÇÑ ÈÄ Incucyte¢ç Cytotox Green Dye ÀÇ
Á¸Àç ÇÏ¿¡ »ì¾ÆÀÖ´Â ¼¼Æ÷¿Í »ç¸êÇÑ ¼¼Æ÷¸¦ ½Ã°£ °æ°ú¿¡ µû¶ó °ËÃâÇß½À´Ï´Ù.
Subpopulation Analysis of Cytotoxic and Cytostatic Treatment Effects
Incucyte¢ç Cell-by-Cell Analysis Software ModuleÀº À§»óÂ÷ À̹ÌÁö¿¡¼ °³º° ¼¼Æ÷¸¦ ºÐÇÒÇÏ°í, ºÐÇÒµÈ °æ°è ³»¿¡¼ Çü±¤°ú °ü·ÃµÈ ÁöÇ¥¸¦ ¼¼Æ÷º°·Î ÃßÃâÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÅëÇÕ ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ »ç¿ëÇÏ¿©, ¼¼Æ÷ Áý´ÜÀº Çü±¤ Ư¼ºÀ» ±âÁØÀ¸·Î ºÐ·ùÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
¿©±â¿¡¼´Â µÎ °¡Áö ´Ù¸¥ ±âÀüÀ» °¡Áø ÈÇÕ¹°µéÀÌ Àüü ¼¼Æ÷ Áý´Ü¿¡ ¹ÌÄ¡´Â ¿µÇâÀ» °üÂûÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
Proliferation À» ÅëÇÑ ¼¼Æ÷ ¼öÀÇ Áõ°¡´Â Label-free, Cytotoxicity ´Â Cytotox Dye fluorescence classification À» »ç¿ëÇÏ¿´½À´Ï´Ù (Figure 7).
½ÇÇèÀ» À§ÇØ µÎ °¡Áö ¾à¹° (Camptothecin (CMP), Cycloheximide (CHX)) ÀÌ »ç¿ëµÇ¾ú½À´Ï´Ù. DNA ÇÕ¼ºÀ» ÀúÇØÇÏ´Â CMP ´Â ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ´Â Cytotoxic ÈÇÕ¹°·Î ¿¹ÃøµÇ¸ç,
´Ü¹éÁú ÇÕ¼ºÀ» ÀúÇØÇÏ´Â CHX ´Â ¼¼Æ÷ÀÇ »ýÁ¸¿¡´Â ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¡Áö ¾Ê°í Áõ½ÄÀ» ¾ïÁ¦ÇÒ °ÍÀ¸·Î ¿¹»óµÇ¾ú½À´Ï´Ù.
ÀÌ µÎ ¾à¹° (10?0.004 ¥ìM) À» Incucyte¢ç Cytotox Green ¿°·á¿Í ÇÔ²² HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷¿¡ ó¸®ÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
¼¼Æ÷ÀÇ ÇÏÀ§ Áý´ÜÀº Cell-by-Cell Analysis Software¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ³ì»ö Çü±¤À» ±âÁØÀ¸·Î ºÐ·ùÇÏ¿´À¸¸ç,
°¢ ¾à¹°ÀÇ À§»ó À̹ÌÁö¿Í È¥ÇÕ Çü±¤ À̹ÌÁö´Â ¼¼Æ÷°¡ ¾î¶»°Ô »ýÁ¸ ¶Ç´Â »ç¸ê »óÅ (³ì»ö) ·Î ºÐ·ùµÇ´ÂÁö º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
¼¼Æ÷¼ö °è»ê (Label-free) ¹× Cytotoxicity Áö¼öÀÇ °è»ê (Àüü ¼¼Æ÷ Áß »ç¸êÇÑ ¼¼Æ÷ÀÇ ºñÀ²) Àº Incucyte¢ç ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¿¡¼ ¼öÇàµÇ¾úÀ¸¸ç,
µÎ ¾à¹°ÀÌ Proliferation °ú Cytotoxicity ¿¡ ¹ÌÄ¡´Â È¿°ú°¡ Â÷µîÀûÀÓÀ» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
CMP´Â ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î HT-1080 ¼¼Æ÷ »ç¸êÀ» À¯µµÇÏ¿© Cytotoxic ¸ÞÄ¿´ÏÁòÀÌ ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÖ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.
¹Ý¸é, CHX ´Â Åë°èÀûÀ¸·Î À¯ÀÇÇÑ Cytotoxicity °¡ °üÂûµÇÁö ¾Ê¾ÒÀ¸¸ç, ´ë½Å ³óµµ ÀÇÁ¸ÀûÀ¸·Î ¼¼Æ÷ Áõ½ÄÀ» ¾ïÁ¦ÇÏ°í ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
°á·ÐÀûÀ¸·Î ÀÌ Á¢±Ù¹ýÀº ¾à¹° À¯µµ Ä¡·á È¿°ú¿Í ÀÛ¿ë ±âÀü¿¡ ´ëÇÑ ÅëÂû·ÂÀ» Á¦°øÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
[Figure 7] Live-Cell Label free ¼¼Æ÷ ¹× Cytotox Æǵ¶À» ÅëÇÑ ¼¼Æ÷ ¾ÆÇü Áý´Ü¿¡¼ÀÇ ¾à¹° ¸ÞÄ¿´ÏÁò Á¶»ç
HT-1080 ¼¶À¯À°Á¾ ¼¼Æ÷ (5,000 Cells/well)´Â Camptothecin (CMP; Cytotoxicity) ¶Ç´Â Cycloheximide (CHX; Cytostatic) ·Î 󸮵ǾúÀ¸¸ç,
Incucyte¢ç Cytotox Green Dye ¿Í ÇÔ²² »ç¿ëµÇ¾ú½À´Ï´Ù. À§»ó ¹× Çü±¤ À̹ÌÁö¸¦ ÅëÇØ ¼¼Æ÷ º°·Î 24½Ã°£ ÈÄ »ýÁ¸ / »ç¸ê ¿©ºÎ¸¦ °¨ÁöÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
Summary and Outlook
¼¼Æ÷ »ç¸êÀº µ¿Àû °úÁ¤À̸ç, Cytotoxicity ¸¦ ¸ð´ÏÅ͸µÇÏ´Â °ÍÀº Á¾¾çÇаú °°Àº ¸¹Àº Ä¡·á ºÐ¾ß¿¡¼ Áß¿äÇÕ´Ï´Ù.
Incucyte¢ç Live-Cell ºÐ¼® ½Ã½ºÅÛ°ú Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© Cytotoxicity ¸¦ ½Ç½Ã°£ µ¿Àû ºÐ¼®ÇÑ °á°ú, ¼¼Æ÷ »ç¸êÀÇ Æ¯Â¡ÀÎ ¼¼Æ÷ Åõ°ú¼ºÀ» Á¤·®ÀûÀ¸·Î ºÐ¼®ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» È®ÀÎÇÏ¿´À¸¸ç,
»ý¸®ÇÐÀûÀÎ Á¶°Ç¿¡¼ Morphology º¯È¸¦ ¸ð´ÏÅ͸µÇÏ¸é¼ µ¿½Ã¿¡ Á¤·®ÈÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
Incucyte¢ç Cytotox ¿°·á¿Í Incucyte¢ç Nuclight ½Ã¾à ¶Ç´Â ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ °áÇÕÇÏ¿© Proliferation °ú Cytotoxicity ¸¦ ´ÙÁß ºÐ¼®ÇÒ ¼öµµ ÀÖÀ¸¸ç,
Incucyte¢ç Cell-by-Cell ºÐ¼® ¼ÒÇÁÆ®¿þ¾î¸¦ ÅëÇØ °³º° ¼¼Æ÷¸¦ Çü±¤ ±â¹ÝÀ¸·Î ºÐ·ùÇÏ¿© Cytotoxicity Áö¼ö ¶Ç´Â Apoptosis Áö¼ö¿Í °°Àº Ãß°¡ ¸Å°³º¯¼ö¸¦ °è»êÇÏ¿©
¼¼Æ÷ Áý´Ü¿¡ ´ëÇÑ ¾à¹°ÀÇ ÀÛ¿ë ±âÀüÀ» Æò°¡ÇÒ ¼öµµ ÀÖ½À´Ï´Ù.
Incucyte¢ç Cytotoxicity Assay ´Â ¾à¸®ÇÐÀû ¿¬±¸¿¡ ÀûÇÕÇÑ °·ÂÇÏ°í À¯¿¬ÇÑ µµ±¸À̸ç, ½Ã°£¿¡ µû¸¥ ¼¼Æ÷ »ç¸ê ÆÐÅÏ¿¡ ´ëÇÑ ´õ ±íÀº ÅëÂû·ÂÀ» Á¦°øÇÕ´Ï´Ù.
|
|
|
|