Phone
  ´ëÇ¥ÀüÈ­ 1577-7956  
  º»     »ç 031-457-9187  
  ´ë     Àü 042-932-1265

Web Site Visitors
  Today 39    
  Yesterday 1081    
  Since 2006 1,916,836    


¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç Á¾ÇÕÄ«´Ù·Î±×
| ¿øº»º¸±â | ¸®½ºÆ®µ¹¾Æ°¡±â |


Introduction

ÀüÅëÀûÀÎ ³ª³ëÀÔÀÚ ºÐ¼®±â´Â µ¿Àû ±¤»ê¶õ (DLS, Dynamic Light Scattering) ±â¼úÀ» »ç¿ëÇÏ¿© »ùÇÃÀ» ·¹ÀÌÀú ºöÀ¸·Î Á¶»çÇÏ°í, ¾×ü¿¡ ºÐ»êµÈ ÀÔÀÚÀÇ ºê¶ó¿î ¿îµ¿¿¡ ÀÇÇØ ¹ß»ýÇÏ´Â »ê¶õ±¤ÀÇ º¯µ¿À» °¨ÁöÇÕ´Ï´Ù. ½Ã°£¿¡ µû¸¥ ÃʱâÀÇ »ê¶õ±¤ÀÇ intensity º¯µ¿Àº »ó°ü °è»êÀ» ÅëÇØ Ã³¸®µÇ¾î »ó°ü ÇÔ¼ö°¡ µµÃâµË´Ï´Ù. Å©±â¿Í Å©±â ºÐÆ÷¸¦ °áÁ¤Çϱâ À§ÇØ Cumulants, NNLS, CONTIN°ú °°Àº ´Ù¾çÇÑ ¼öÇÐÀû ¸ðµ¨ÀÌ »ç¿ëµË´Ï´Ù.

ÀϹÝÀûÀ¸·Î DLS ºÐ¼®±â´Â¹èÄ¡ ¸ðµå (batch mode) ¸¦ »ç¿ëÇϸç, ÀÌ´Â ¼®¿µ ¶Ç´Â Çöó½ºÆ½ Å¥ºªÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ÀüÅëÀûÀÎ Å×½ºÆ® ¹æ½ÄÀ» ÀǹÌÇÕ´Ï´Ù. ÀÌ ¹æ½ÄÀº Size Distribution Å×½ºÆ®¿¡¼­, ƯÈ÷ ³Ð°Ô ºÐÆ÷µÈ »ùÇÃÀÇ °æ¿ì Çػ󵵰¡ ³·½À´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ, Å©±â ºÐÆ÷¿¡ ´ëÇÑ °è»êÀº ¾Ë°í¸®Áò¿¡ ¸Å¿ì ÀÇÁ¸ÀûÀ̸ç, °¡Àå ³ôÀº Çػ󵵸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿©µµ ÀÔÀÚ Å©±â°¡ ¼­·Î 2.5 - 3¹è Â÷ÀÌ°¡ ³ª´Â ÀÔÀڵ鸸 ±¸º°ÀÌ °¡´ÉÇÒ Á¤µµ·Î ÀÔÀÚ Çػ󵵰¡ ¸Å¿ì ³·½À´Ï´Ù.

¹Ý¸é, DLS Flow Mode ´Â °¢ °³º° ÀÔÀÚ¸¦ detection ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â Àåºñ¸¦ DLS Àåºñ ÀÌÀü ´Ü°è·Î ¿¬°áÇÏ¿© ÇÔ²² »ç¿ëÇÏ¸é ¾Ë°í¸®Áò¿¡ ÀÇÁ¸ÇÏÁö ¾Ê°í °³º° ÀÔÀÚÀÇ Å©±â¸¦ Á¤È®ÇÏ°Ô °¨ÁöÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç Çػ󵵴 ÃÖ´ë 1.3:1¿¡ ´ÞÇÕ´Ï´Ù.

ÀÌ Application Note ¿¡¼­´Â BeNano 180 Zeta Pro Àåºñ ¾Õ¿¡ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ ¿¬°áÇÏ¿© BSA (Bovine Serum Albumin, BSA) »ùÇÃÀÇ Å©±â ºÐÆ÷¸¦ È®ÀÎÇÏ¿´½À´Ï´Ù.


Instrumentation

BSA ¿ë¾×Àº PBS Buffer ¿¡ ³óµµ 5 mg/mL ·Î ÁغñÇÏ¿´À¸¸ç, 10ºÐ µ¿¾È ±³¹Ý ÈÄ 220nm ¼ö¼º ÇÊÅ͸¦ ÅëÇØ filteration ÇÏ¿´½À´Ï´Ù. ÀÔÀÚÀÇ ºÐ¸®¸¦ À§ÇØ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ BeNano 180 Zeta Pro ¿¡ ¿¬°áÇÏ¿´À¸¸ç ºÐ¸®µÈ °³º° ÀÔÀÚ´Â 25¡ÆC¿¡¼­ BeNano 180 Zeta Pro ¿¡ ÀÇÇØ ÀÔµµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ¿´½À´Ï´Ù.

Chromatographic Conditions :
Mobile Phase : PBS Buffer
Flow Rate : 0.4 mL/min
Injection Volume : 100 uL


Results and Discussion


Figure 1. Intensity, RI, and Size Effluent Curves of BSA

Figure 1 ¿¡¼­ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ Åë°úÇÑ ½Ã·á »ùÇÃÀÇ À¯Ãâ °î¼±Àº ÃÑ 16mL ÀÇ À¯Ãâ ºÎÇÇ¿¡¼­ BSA ÀÇ ¿©·¯ peak ¸¦ º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù. ¾à 6mL ¿¡¼­ ³ªÅ¸³ª´Â peak ´Â ÁýÇÕü peak ¸¦ ³ªÅ¸³»¸ç, 8 - 10mL »çÀÌÀÇ peak ´Â ºÐ¸®µÈ ¿Ã¸®°í¸Ó¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.

¸¶Áö¸·À¸·Î 10.5mL ¿¡¼­ ³ªÅ¸³ª´Â ÁÖ¿ä peak ´Â BSA ÀÇ ´Ü·®Ã¼ (monmer) ¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù. ÁÖ¿ä peak ÀÇ ³ÐÀº ¸éÀûÀº ´ëºÎºÐÀÇ ´Ü¹éÁúÀÌ ´Ü·®Ã¼ »óÅ·ΠÁ¸ÀçÇÔÀ» ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.

Å©±â À¯Ãâ °î¼±¿¡¼­ °ËÃâµÈ ÀÔÀÚ Å©±â(»¡°£ Á¡)ÀÇ °¨¼Ò´Â SEC ºÐ¸® ¿ø¸®¿Í Àß ÀÏÄ¡Çϸç, ÀÌ´Â »ùÇà ºÐ¸®¿¡ ÀÖ¾î SEC Àü¸é ÀåÄ¡ÀÇ È¿À²¼ºÀ» È®ÀνÃÄÑ ÁÖ°í, BeNano°¡ °ËÃâ±â·Î¼­ °¢ À¯Ãâ ¼ººÐÀÇ ÀÔÀÚ Å©±â Á¤º¸¸¦ È¿°úÀûÀ¸·Î ¾òÀ» ¼ö ÀÖÀ½À» ÀÔÁõÇÕ´Ï´Ù.


Figure 2. Intensity Distribution Curve of BSA (Bar Chart)


Figure 3. Intensity Distribution Curve of BSA (Line Chart)

Figures 2 ¿Í Figures 3 Àº Å©·Î¸¶Åä±×·¡ÇÇ effluent curve ¸¦ intensity distribution curve À¸·Î º¯È¯ÇÑ °ÍÀ¸·Î ºÐ¸®µÈ ¿Ã¸®°í¸Ó¸¦ ¸íÈ®ÇÏ°Ô ½Äº°Çϸç, ´Ü·®Ã¼´Â 7.21nm ¿¡¼­ È®ÀεǾú´Ù. ÀÌ´Â BSA ´Ü·®Ã¼ÀÇ ÀÌ·ÐÀû Å©±â (~7nm) ¿Í ¸Å¿ì Àß ÀÏÄ¡ÇÕ´Ï´Ù. ´Ù¸¥ À¯Ãâ ¼ººÐÀÇ Å©±â¿Í ¸éÀûÀº Table 1¿¡ ³ª¿Í ÀÖ½À´Ï´Ù.


Table 1. Measured distribution Peaks of BSA


Figure 4. Batch-mode detection of intensity distribution curve of BSA

batch-mode detection ¿¡¼­ÀÇ intensity distribution curve (Figure 4) ´Â µÎ °³ÀÇ peak ¸¸À» ³ªÅ¸³À´Ï´Ù. ÀÛÀº peak (¾à 10nm)´Â ´Ü·®Ã¼, ÀÌ·®Ã¼, »ï·®Ã¼ ¹× ±âŸ ¿Ã¸®°í¸ÓÀÇ Å©±â ºÐÆ÷¿¡ ÇØ´çÇϸç, Å« peak (¾à 100nm) ´Â ´õ Å« ÁýÇÕü¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.


Figure 5. Comparison between batch-mode (line chart) and flow mode (bar chart) intensity distribution curves

Figure 5 ¿¡¼­ flow mode ¿Í batch-mode ÀÇ detection °á°ú¸¦ ºñ±³ÇÑ °á°ú, flow mode ´Â ÀÛÀº Å©±âÀÇ peak ³»¿¡¼­ ¸Å¿ì ÀÛÀº Å©±â Â÷À̸¦ °¡Áø ¿Ã¸®°í¸Ó ¼ººÐµéÀ» ¼º°øÀûÀ¸·Î ±¸º°ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.


Conclusion

ÀÔÀÚ¸¦ ºÐ¸® ½ÃÅ°´Â ÀåÄ¡¸¦ BeNano Àåºñ Àü´Ü°è¿¡ ¿¬°áÇÏ¿© flow mode ·Î »ç¿ëÇÏ´Â BeNano ´Â ÀÔÀÚ °ËÃâ±â·Î »ç¿ëµÇ¾î Å©±â ÃøÁ¤ÀÇ Çػ󵵸¦ Å©°Ô Çâ»ó½Ãų ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.

SEC (Size Exclusion Chromatography) ¿Í ¿¬°áÇÑ BeNano 180 Zeta Pro ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© BSA ÀÇ ÀÔµµ¸¦ ºÐ¼®ÇÑ ÀÌ Application Note °á°ú¸¦ ÅëÇØ ÀÌ·¯ÇÑ BeNano Flow Mode ÀÇ °ËÃâ´É·ÂÀÌ ÀÔÁõµÇ¾úÀ¸¸ç, °íÇØ»óµµ Å©±â ÃøÁ¤ ºÐ¾ß¿¡¼­ Ź¿ùÇÑ ÀáÀç·ÂÀÌ ÀÖ´Ù´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÖ¾ú½À´Ï´Ù. BSA¸¦ ÃøÁ¤ÇÔÀ¸·Î½á ÀÌ ÀÀ¿ë ³ëÆ®´Â BeNano È帧 ¸ðµåÀÇ °ËÃâ ´É·ÂÀ» ÀÔÁõÇÏ¿´À¸¸ç, °íÇØ»óµµ Å©±â ÃøÁ¤ ºÐ¾ß¿¡¼­ÀÇ ÀáÀç·ÂÀ» È¿°úÀûÀ¸·Î º¸¿©ÁÖ¾ú½À´Ï´Ù.







 
(ÁÖ)¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç   |   ´ëÇ¥ : ÀÌÇü¿­   |   »ç¾÷ÀÚµî·Ï¹øÈ£ : 138-81-34745
±º Æ÷ º» »ç   |   (15853) °æ±âµµ ±ºÆ÷½Ã ÇѼ¼·Î 48 ³²¿øºôµù 2Ãþ   |   ÀüÈ­ : 1577-7956 (1)   |   Æѽº : 031-457-9188   |   À̸ÞÀÏ : info@yjcorp.co.kr
´ë Àü Áö »ç   |   (34036) ´ëÀü½Ã À¯¼º±¸ Å×Å©³ë10·Î 29 ÆÄÅ©ÆÓ¸®½º 2Ãþ   |   ÀüÈ­ : 1577-7956 (2)   |   Æѽº : 042-932-1266   |   À̸ÞÀÏ : info@yjcorp.co.kr