Phone |
|
|
  ´ëÇ¥ÀüÈ |
1577-7956   |
  º»     »ç |
031-457-9187   |
  ´ë     Àü |
042-932-1265 |
|
|
Web Site Visitors |
|
|
  Today |
39     |
  Yesterday |
1081     |
  Since 2006 |
1,916,836     |
|
|
|
|
¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç Á¾ÇÕÄ«´Ù·Î±× |
|
|
|
Introduction
ÀüÅëÀûÀÎ ³ª³ëÀÔÀÚ ºÐ¼®±â´Â µ¿Àû ±¤»ê¶õ (DLS, Dynamic Light Scattering) ±â¼úÀ» »ç¿ëÇÏ¿© »ùÇÃÀ» ·¹ÀÌÀú ºöÀ¸·Î Á¶»çÇÏ°í, ¾×ü¿¡ ºÐ»êµÈ ÀÔÀÚÀÇ ºê¶ó¿î ¿îµ¿¿¡ ÀÇÇØ ¹ß»ýÇÏ´Â
»ê¶õ±¤ÀÇ º¯µ¿À» °¨ÁöÇÕ´Ï´Ù. ½Ã°£¿¡ µû¸¥ ÃʱâÀÇ »ê¶õ±¤ÀÇ intensity º¯µ¿Àº »ó°ü °è»êÀ» ÅëÇØ Ã³¸®µÇ¾î »ó°ü ÇÔ¼ö°¡ µµÃâµË´Ï´Ù.
Å©±â¿Í Å©±â ºÐÆ÷¸¦ °áÁ¤Çϱâ À§ÇØ Cumulants, NNLS, CONTIN°ú °°Àº ´Ù¾çÇÑ ¼öÇÐÀû ¸ðµ¨ÀÌ »ç¿ëµË´Ï´Ù.
ÀϹÝÀûÀ¸·Î DLS ºÐ¼®±â´Â¹èÄ¡ ¸ðµå (batch mode) ¸¦ »ç¿ëÇϸç, ÀÌ´Â ¼®¿µ ¶Ç´Â Çöó½ºÆ½ Å¥ºªÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ÀüÅëÀûÀÎ Å×½ºÆ® ¹æ½ÄÀ» ÀǹÌÇÕ´Ï´Ù.
ÀÌ ¹æ½ÄÀº Size Distribution Å×½ºÆ®¿¡¼, ƯÈ÷ ³Ð°Ô ºÐÆ÷µÈ »ùÇÃÀÇ °æ¿ì Çػ󵵰¡ ³·½À´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ, Å©±â ºÐÆ÷¿¡ ´ëÇÑ °è»êÀº ¾Ë°í¸®Áò¿¡ ¸Å¿ì ÀÇÁ¸ÀûÀ̸ç,
°¡Àå ³ôÀº Çػ󵵸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿©µµ ÀÔÀÚ Å©±â°¡ ¼·Î 2.5 - 3¹è Â÷ÀÌ°¡ ³ª´Â ÀÔÀڵ鸸 ±¸º°ÀÌ °¡´ÉÇÒ Á¤µµ·Î ÀÔÀÚ Çػ󵵰¡ ¸Å¿ì ³·½À´Ï´Ù.
¹Ý¸é, DLS Flow Mode ´Â °¢ °³º° ÀÔÀÚ¸¦ detection ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â Àåºñ¸¦ DLS Àåºñ ÀÌÀü ´Ü°è·Î ¿¬°áÇÏ¿© ÇÔ²² »ç¿ëÇÏ¸é ¾Ë°í¸®Áò¿¡ ÀÇÁ¸ÇÏÁö ¾Ê°í
°³º° ÀÔÀÚÀÇ Å©±â¸¦ Á¤È®ÇÏ°Ô °¨ÁöÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç Çػ󵵴 ÃÖ´ë 1.3:1¿¡ ´ÞÇÕ´Ï´Ù.
ÀÌ Application Note ¿¡¼´Â BeNano 180 Zeta Pro Àåºñ ¾Õ¿¡ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ ¿¬°áÇÏ¿© BSA (Bovine Serum Albumin, BSA) »ùÇÃÀÇ Å©±â ºÐÆ÷¸¦ È®ÀÎÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
Instrumentation
BSA ¿ë¾×Àº PBS Buffer ¿¡ ³óµµ 5 mg/mL ·Î ÁغñÇÏ¿´À¸¸ç, 10ºÐ µ¿¾È ±³¹Ý ÈÄ 220nm ¼ö¼º ÇÊÅ͸¦ ÅëÇØ filteration ÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
ÀÔÀÚÀÇ ºÐ¸®¸¦ À§ÇØ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ BeNano 180 Zeta Pro ¿¡ ¿¬°áÇÏ¿´À¸¸ç
ºÐ¸®µÈ °³º° ÀÔÀÚ´Â 25¡ÆC¿¡¼ BeNano 180 Zeta Pro ¿¡ ÀÇÇØ ÀÔµµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ¿´½À´Ï´Ù.
Chromatographic Conditions :
Mobile Phase : PBS Buffer
Flow Rate : 0.4 mL/min
Injection Volume : 100 uL
Results and Discussion
Figure 1. Intensity, RI, and Size Effluent Curves of BSA
Figure 1 ¿¡¼ SEC (Size Exclusion Chromatography) Àåºñ¸¦ Åë°úÇÑ ½Ã·á »ùÇÃÀÇ À¯Ãâ °î¼±Àº ÃÑ 16mL ÀÇ À¯Ãâ ºÎÇÇ¿¡¼ BSA ÀÇ ¿©·¯ peak ¸¦ º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
¾à 6mL ¿¡¼ ³ªÅ¸³ª´Â peak ´Â ÁýÇÕü peak ¸¦ ³ªÅ¸³»¸ç, 8 - 10mL »çÀÌÀÇ peak ´Â ºÐ¸®µÈ ¿Ã¸®°í¸Ó¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.
¸¶Áö¸·À¸·Î 10.5mL ¿¡¼ ³ªÅ¸³ª´Â ÁÖ¿ä peak ´Â BSA ÀÇ ´Ü·®Ã¼ (monmer) ¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù. ÁÖ¿ä peak ÀÇ ³ÐÀº ¸éÀûÀº ´ëºÎºÐÀÇ ´Ü¹éÁúÀÌ ´Ü·®Ã¼ »óÅ·ΠÁ¸ÀçÇÔÀ» ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.
Å©±â À¯Ãâ °î¼±¿¡¼ °ËÃâµÈ ÀÔÀÚ Å©±â(»¡°£ Á¡)ÀÇ °¨¼Ò´Â SEC ºÐ¸® ¿ø¸®¿Í Àß ÀÏÄ¡Çϸç, ÀÌ´Â »ùÇà ºÐ¸®¿¡ ÀÖ¾î SEC Àü¸é ÀåÄ¡ÀÇ È¿À²¼ºÀ» È®ÀνÃÄÑ ÁÖ°í,
BeNano°¡ °ËÃâ±â·Î¼ °¢ À¯Ãâ ¼ººÐÀÇ ÀÔÀÚ Å©±â Á¤º¸¸¦ È¿°úÀûÀ¸·Î ¾òÀ» ¼ö ÀÖÀ½À» ÀÔÁõÇÕ´Ï´Ù.
Figure 2. Intensity Distribution Curve of BSA (Bar Chart)
Figure 3. Intensity Distribution Curve of BSA (Line Chart)
Figures 2 ¿Í Figures 3 Àº Å©·Î¸¶Åä±×·¡ÇÇ effluent curve ¸¦ intensity distribution curve À¸·Î º¯È¯ÇÑ °ÍÀ¸·Î ºÐ¸®µÈ ¿Ã¸®°í¸Ó¸¦ ¸íÈ®ÇÏ°Ô ½Äº°Çϸç, ´Ü·®Ã¼´Â 7.21nm ¿¡¼ È®ÀεǾú´Ù.
ÀÌ´Â BSA ´Ü·®Ã¼ÀÇ ÀÌ·ÐÀû Å©±â (~7nm) ¿Í ¸Å¿ì Àß ÀÏÄ¡ÇÕ´Ï´Ù. ´Ù¸¥ À¯Ãâ ¼ººÐÀÇ Å©±â¿Í ¸éÀûÀº Table 1¿¡ ³ª¿Í ÀÖ½À´Ï´Ù.
Table 1. Measured distribution Peaks of BSA
Figure 4. Batch-mode detection of intensity distribution curve of BSA
batch-mode detection ¿¡¼ÀÇ intensity distribution curve (Figure 4) ´Â µÎ °³ÀÇ peak ¸¸À» ³ªÅ¸³À´Ï´Ù. ÀÛÀº peak (¾à 10nm)´Â ´Ü·®Ã¼, ÀÌ·®Ã¼, »ï·®Ã¼ ¹× ±âŸ ¿Ã¸®°í¸ÓÀÇ
Å©±â ºÐÆ÷¿¡ ÇØ´çÇϸç, Å« peak (¾à 100nm) ´Â ´õ Å« ÁýÇÕü¸¦ ³ªÅ¸³À´Ï´Ù.
Figure 5. Comparison between batch-mode (line chart) and flow mode (bar chart) intensity distribution curves
Figure 5 ¿¡¼ flow mode ¿Í batch-mode ÀÇ detection °á°ú¸¦ ºñ±³ÇÑ °á°ú, flow mode ´Â ÀÛÀº Å©±âÀÇ peak ³»¿¡¼ ¸Å¿ì ÀÛÀº Å©±â Â÷À̸¦ °¡Áø ¿Ã¸®°í¸Ó ¼ººÐµéÀ» ¼º°øÀûÀ¸·Î
±¸º°ÇÒ ¼ö ÀÖÀ½À» º¸¿©ÁÝ´Ï´Ù.
Conclusion
ÀÔÀÚ¸¦ ºÐ¸® ½ÃÅ°´Â ÀåÄ¡¸¦ BeNano Àåºñ Àü´Ü°è¿¡ ¿¬°áÇÏ¿© flow mode ·Î »ç¿ëÇÏ´Â BeNano ´Â ÀÔÀÚ °ËÃâ±â·Î »ç¿ëµÇ¾î Å©±â ÃøÁ¤ÀÇ Çػ󵵸¦ Å©°Ô Çâ»ó½Ãų ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
SEC (Size Exclusion Chromatography) ¿Í ¿¬°áÇÑ BeNano 180 Zeta Pro ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© BSA ÀÇ ÀÔµµ¸¦ ºÐ¼®ÇÑ ÀÌ Application Note °á°ú¸¦ ÅëÇØ ÀÌ·¯ÇÑ BeNano Flow Mode ÀÇ
°ËÃâ´É·ÂÀÌ ÀÔÁõµÇ¾úÀ¸¸ç, °íÇØ»óµµ Å©±â ÃøÁ¤ ºÐ¾ß¿¡¼ Ź¿ùÇÑ ÀáÀç·ÂÀÌ ÀÖ´Ù´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÖ¾ú½À´Ï´Ù.
BSA¸¦ ÃøÁ¤ÇÔÀ¸·Î½á ÀÌ ÀÀ¿ë ³ëÆ®´Â BeNano È帧 ¸ðµåÀÇ °ËÃâ ´É·ÂÀ» ÀÔÁõÇÏ¿´À¸¸ç, °íÇØ»óµµ Å©±â ÃøÁ¤ ºÐ¾ß¿¡¼ÀÇ ÀáÀç·ÂÀ» È¿°úÀûÀ¸·Î º¸¿©ÁÖ¾ú½À´Ï´Ù.
|
|
|
|