Phone |
|
|
  ´ëÇ¥ÀüÈ |
1577-7956   |
  º»     »ç |
031-457-9187   |
  ´ë     Àü |
042-932-1265 |
|
|
Web Site Visitors |
|
|
  Today |
646     |
  Yesterday |
948     |
  Since 2006 |
1,934,207     |
|
|
|
|
¿µÁøÄÚÆÛ·¹ÀÌ¼Ç Á¾ÇÕÄ«´Ù·Î±× |
|
|
Introduction
Æ÷À¯µ¿¹°¼¼Æ÷¿Í °°ÀÌ °ïÃæ¼¼Æ÷µµ post-translational modification °ú protein folding µîÀ» ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â eukaryotic protein À» ¸¸µé ¼ö ÀÖ´Ù.
°¡Àå ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â °ïÃæ¼¼Æ÷´Â Sf9 (Spodoptera frugiperda ovary cell) cell ·Î¼ suspension °ú adherent growth µÑ ´Ù °¡´ÉÇÑ ¼¼Æ÷ÀÌ´Ù.
Baculovirus expression system À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© Sf9 cell ¿¡¼ ´Ù¾çÇÑ Á¾·ùÀÇ recombinant protein À» »ý»êÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
BIOSTAT¢ç RM optical (Figure 1) Àº rocking motion technology ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ´Â °¡Àå Áøº¸µÈ ±â¼úÀ» ±â¹ÝÀ¸·Î ÇÏ´Â ÀÏȸ¿ë ¹ÙÀÌ¿À¸®¾×ÅÍÀÌ´Ù.
Bag ÇüÅÂÀÇ cultivation chamber ´Â ÁÂ.¿ì·Î ¿òÁ÷¿© wave mixing À» ÀÏÀ¸Å°´Âµ¥ ¸Å¿ì ºÎµå·¯¿î shear ¸¦ ¼¼Æ÷¿¡ °¡ÇÏ°Ô µÈ´Ù.
ÀÌ·Î ÀÎÇØ bag ¼ÓÀÇ liquid Ç¥¸é¿¡¼ mass transfer °¡ ¸Å¿ì È¿À²ÀûÀ¸·Î ÀϾ°Ô µÈ´Ù.
ÀÏȸ¿ë bag Àº Á¦¾à¿ë grade ÀÎ ethyl vinyl acetate (EVA) membrane ÀÌ ´ÙÃþÀ¸·Î ÀÌ·ç¾î Á® ÀÖ´Ù.
¿©±â¼´Â ÀÏȸ¿ë Cultibag RM system (ÇöÀç´Â Flexsafe¢ç RM system À¸·Î À̸§ÀÌ ¹Ù²ñ) ÀÌ ¾î¶»°Ô È¿À²ÀûÀ¸·Î Sf9 cell line À» ¹è¾çÇÏ´ÂÁö »ìÆ캸°íÀÚ ÇÑ´Ù.
Materials & Methods
Serum-free sf-900-II SFM media ¿¡¼ Sf9 cell line À» ¹è¾çÇÏ¿´´Ù.
Cultibag RM 2 L Optical bag (DBO002L) ¿¡ media 800ml ¸¦ ³ÖÀº ÈÄ air ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© bag À» ºÎÇ®·È´Ù.
±×¸®°í DO ¿Í pH ¼¾¼¸¦ °¢°¢ÀÇ port ¿¡ ²ÈÀº ÈÄ ºÐ´ç 8 rock ¼Óµµ·Î 2½Ã°£ µ¿¾È equilibration ÇÏ¿´´Ù.
Pre-culture ÇÑ Sf9 cell À» seeding density °¡ 0.7 x 10^6 cell/ml ÀÌ µÇµµ·Ï equilibration À» ÇÑ bag ¿¡ seeding ÇÏ¿´´Ù.
Bag ÀÇ ¿Âµµ´Â 28¡É, DO ´Â 60%, pH ´Â 6.2 ±×¸®°í rocking ¼Óµµ´Â 18~25, rocking °¢µµ´Â 6¡Æ ·Î ¼³Á¤ÇÏ¿´´Ù.
¸ÅÀÏ 5ml sample À» äÃëÇÏ¿© trypan blue exclusion method ¸¦ ÀÌ¿ëÇØ viable cell density ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ¿´À¸¸ç ¶ÇÇÑ glucose ¼ÒºñÀ²°ú lactate »ý¼º·üµµ ÃøÁ¤ÇÏ¿´´Ù.
Results
¹è¾ç 9ÀÏ°¿¡ ÃÖ´ë cell density 11.87 x 10^6 cells/ml À» ±¸ÇÏ¿´°í cell viability ´Â 9ÀÏ ÀÌÈÄ¿¡ °¨¼ÒÇϱ⠽ÃÀÛÇÏ¿© 12ÀÏ°¿¡ 50% ·Î ±Þ°¨ÇÏ¿´´Ù.
Glucose ´Â ¹è¾çÁß¿¡ 10.2 mg/ml ¿¡¼ 9ÀÏ° 4 mg/ml À¸·Î Áö¼Ó °¨¼ÒÇÏ¿´À¸¸ç
Lactate ÀÇ ÃÑ»ý¼º·®Àº ¹è¾ç ¸¶Áö¸·ÀÏ 10.2 mg/ml ¿´´Ù.
±× ÈÄ 10 L Cultibag RM bag À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© 5 L media À» ³Ö°í scale up cultivationÀ» ÇÏ¿´À¸¸ç ÃÖ´ë cell density ´Â 2 L Cultibag RM bag ¿¡¼¿Í À¯»çÇÏ°Ô
12.9 x 10^6 cells/ml °ªÀ» ±¸ÇÏ¿´´Ù.
Discussion
DO (dissolved oxygen) ´Â 60% ·Î ¼³Á¤ÇÏ¿´À¸¸ç ÆíÂ÷´Â ¡¾5% ÀÌ´Ù.
DO Á¶ÀýÀº nitrogen, gas flow, oxygen À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© Á¶ÀýÇÏ¿´À¸¸ç cascade mode ·Î Á¶ÀýÇÏ¿´´Ù.
Oxygen Àº ¼¼Æ÷°¡ log phase ¼ºÀå±â·Î ÁøÀÔÇÑ ÀÌÈÄ¿¡ DO ¸¦ Á¶ÀýÇϴµ¥ »ç¿ëµÈ´Ù. air ¸¦ ¿¬¼ÓÀ¸·Î °ø±ÞÇÏ´Â °Íº¸´Ù oxygen À» °£ÇæÀûÀ¸·Î
°ø±ÞÇÏ´Â °ÍÀÌ media Áõ¹ßÀ» °¨¼Ò½Ãų ¼ö ÀÖ´Ù.
pH ´Â 6.2 ·Î Á¶ÀýÇϴµ¥ 0.1 N NaHCO3 ¿Í CO©ü ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© cascade mode ¹æ½ÄÀ¸·Î Á¶ÀýÇÑ´Ù. ¹è¾çÃʱ⿡´Â CO©ü °¡ ÇÊ¿ä¾øÀ¸³ª ¹è¾ç ¸¶Áö¸·´Ü°è·Î °¡¸é °¥¼ö·Ï
³ëÆó¹°ÀÌ ¸¹¾ÆÁö¸é¼ pH °¡ »ó½ÂÇÏ°Ô µÇ´Âµ¥ ÀÌ ¶§ CO©ü ¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© pH ¸¦ Á¶ÀýÇÑ´Ù.
Rocking Speed
Rocking speed ´Â ¹è¾ç¾×ÀÇ ¿ë·®°ú cell density ¿¡ µû¶ó °áÁ¤µÈ´Ù.
¹è¾ç bag ÀÇ ÃÖ´ë working volume ÀÇ 20-30% Á¤µµ¸¦ ¹è¾çÇÑ´Ù¸é mixing À» À§ÇÑ rocking speed ´Â 15 rocks ¸é ÃæºÐÇÏ´Ù.
¸¸¾à ÃÖ´ë working volume 100% ¿ë·®À¸·Î ¹è¾çÇϰųª cell density °¡ ¸¹À»¶§¿¡´Â 18-25 rocks ¼Óµµ·Î rocking ÇÏ´Â°Ô ÁÁ´Ù.
Sf9 cell À» 2L ¶Ç´Â 10L Cultubag RM system ¿¡¼ ¹è¾çÇÒ °æ¿ì¿¡´Â rocking speed ¸¦ 18 - 23 Á¤µµ·Î ÇϸéÁÁ´Ù.
Rocking Angle
¹è¾ç Ãʱ⿡´Â rocking °¢µµ¸¦ 6µµ·Î ÇÏ´Â °ÍÀÌ Àû´çÇÏ´Ù.
ÀϹÝÀûÀ¸·Î ¼¼Æ÷ÀÇ »ê¼Ò¿ä±¸·®ÀÌ Áõ°¡Çϸé rocking °¢µµµµ Áõ°¡ÇÏ´Â °Ô ÁÁ´Ù.
Cultubag RM bag ¿¡¼ Çã¿ëµÇ´Â ÃÖ´ë·®À¸·Î ¹è¾ç¿ë¾×À» ÀÌ¿ëÇϸé 6¡Æ - 10¡Æ ¹üÀ§¿¡¼ »ç¿ëÇÏ¸é µÈ´Ù.
2L ¶Ç´Â 10L Cultubag RM bag ÀÇ °æ¿ì¿¡´Â 6¡Æ rocking °¢µµ°¡ Àû´çÇÏ´Ù.
Aeration Rate
DO ´Â nitrogen, air ±×¸®°í oxygen À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© cascade mode ¹æ½ÄÀ¸·Î Á¶ÀýµÈ´Ù. Air flow ´Â 50 ~ 300ml/min ¹üÀ§¿¡¼ Á¶ÀýµÇ°í nitrogen °ú oxygen Àº
100% ·Î ÇÏ¿© Á¶Àý¿¡ »ç¿ëµÈ´Ù. DO ´Â 60% À¯ÁöÇÏ´Â °ÍÀÌ Àû´çÇÏ´Ù.
Conclusion
¿©±â¼ ¿ì¸®´Â ÀÏȸ¿ë ¹ÙÀÌ¿À¸®¾×ÅÍÀÎ BIOSTAT Cultibag 20 RM ÀÌ serum free chemically defined media ¿¡¼ Sf9 cell À» È¿À²ÀûÀ¸·Î ¹è¾çÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÏ¿´´Ù.
ÀϹÝÀûÀ¸·Î °ïÃæ¼¼Æ÷´Â mammalian cell º¸´Ù »ê¼Ò¸¦ ÈξÀ ´õ ¸¹ÀÌ ÇÊ¿ä·Î Çϴµ¥ BIOSTAT Cultibag RM Àº Sf9 ¼¼Æ÷ÀÇ ¼ºÀåÀ» È¿À²ÀûÀ¸·Î ÇØ ÁÖ¾ú´Ù.
ÀÏȸ¿ë ¹ÙÀÌ¿À¸®¾×ÅÍ´Â ¿À´Ã³¯ R&D, °øÁ¤°³¹ß, ±×¸®°í ¼Ò¿ë·® »ý»ê µî¿¡¼ ³Î¸® »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Â ÃÖ÷´Ü ±â¼úÀÌ´Ù.
|
|
|