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Abstract
사용한 배양액의 성분을 분석하는 것은 bioreactor 와 배양액의 가장 적절한 조건을 구하는데 매우 중요하다.
싸토리우스사의 ambr 250 microbioreactor (용량 : 250ml 이하) 에서 CHO cell 을 고농도 ammonia (NH3) 환경에서 배양한 후
spent media 의 성분을 REBEL capillary electrophoresis mass spectrometer (CE-MS) 분석장비를 이용하여 분석하였다.
Ala, Arg, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Thr, Trp, Tyr, 그리고 Val 아미노산의 함량은 거의 모든 bioreactor 에서 순증가하였으며
특히 Gly 의 경우 모든 bioreactor 에서 8배나 증가하였다.
다른 media 성분들은 배양 마지막에 다소 감소하거나 완전히 소실되었는데 예를 들어 Asn 은 unstressed 그리고 10mM NH3-stressed
bioreactors 에서는 거의 고갈되었는데 30mM NH3-stressed bioreactor 에서는 배양 초기에 비해 배양 마지막에 농도가 약 2배가 증가하였다.
또한 30mM NH3-stressed condition 에서 choline 의 농도가 완전히 고갈되거나 빠르게 소진되기도 하는데 배양 시작 후 약 36시간이 지나면
배양액에 choline 이 더 이상 존재하지 않았다.
요약하면, 이번 테스트를 통해 배양액의 각 성분들의 함량은 여러가지 다른 조건하에서 각기 다른 변화를 보인다는 것이다.
spent media 를 자주 분석하여 세포배양공정의 변화를 실시간으로 학인하는 것이 적합한 세포배양 공정을 만드는데 매우 중요하다.
Figure 1 : A parallel microbioreactor process of CHO cell cultures was the biological model used
for demonstration. Spent media analysis was run on a new integrated benchtop CE-MS analyzer.
CONCLUSION
CE-MS Analyzer 인 REBEL Cell Culture Media Analyzer 를 이용하여 6개 microbioreactor 에서 배양에 사용된 media 의아미노산, dipeptide
그리고 비타민의 함량을 분석하였다.
unstressed system 에서는 10 mM NH3-stressed bioreactors 에 비해 igG 가 약 1.4배 더 많이 생산되었으며 30 mM NH3-stressed bioreactors 에 비해서는
약 13배가 많은 IgG 가 만들어졌다.
VCDs, cell viability, lactate, 그리고 glucose 수치는 unstressed system 과 10 mM NH3-stressed bioreactors 모두 비슷하게 유지되었다
그러나 30 mM NH3-stressed bioreactors 에서 132시간 배양하였을 때에는 cell viability, lactate, 그리고 glucose 수치에 큰 변화가 관찰되었다.
REBEL Cell Culture Media Analyzer
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